Caracterização Molecular de Alterações Genéticas em Tumores Sólidos Pediátricos

Introdução: Na Argentina, os tumores sólidos do sistema nervoso central (SNC) (19%) e os tumores sólidos não pertencentes ao SNC (25%) representam 44% dos tumores pediátricos. A nova classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016, que inclui a caracterização genômica, compreende mais de 100 entidades e subclasses de tumores do SNC. Em crianças, os tumores de linhagem glial (gliomas) são os mais frequentes e compreendem astrocitomas, ependimomas e oligodendrogliomas, enquanto os tumores embrionários do SNC constituem um grupo heterogêneo de tumores grau IV da OMS. Os tumores de tecidos moles (TST) pediátricos apresentam dificuldades para o diagnóstico preciso, uma vez que suas características morfológicas e imunofenotípicas se sobrepõem entre os diferentes padrões histológicos.

O surgimento de novas técnicas moleculares gerou um grande avanço na área de tumores sólidos, principalmente na definição molecular de grupos de pacientes. Esse fato torna viável o tratamento sob medida, de acordo com a biologia do tumor.

Em particular, em crianças, a identificação dos alvos do tratamento é especialmente importante, pois pode evitar sequelas desnecessárias em uma criança em crescimento. Este projeto permite a articulação entre os grupos de pesquisa básica e clínica, consolidando assim o objetivo da pesquisa básica translacional e gerando conhecimento clínico e básico sobre a patogênese dos tumores sólidos pediátricos em nosso país.

Objetivo: Padronizar e implementar uma estratégia molecular multinível abrangente, utilizando técnicas de média e alta complexidade, para a detecção de alterações moleculares em tumores sólidos pediátricos primários (neuroblastoma, rabdomiossarcoma, tumores da família do sarcoma de Ewing, sarcomas de partes moles e tumores do SNC (gliomas e embrionário)), que podem ser aplicados ao diagnóstico, prognóstico e/ou uso de terapias direcionadas contra alvos moleculares, a fim de fornecer uma oportunidade terapêutica personalizada.

Material e métodos: Casos pediátricos de tumores sólidos serão incluídos prospectivamente. Com base nas estatísticas dos centros participantes, serão incluídas 100 amostras. De cada caso, uma biópsia fixada em formalina estará disponível e, quando possível, um fragmento também será preservado a -70ºC. Os dados clínicos e de acompanhamento serão obtidos dos registros clínicos.

As abordagens metodológicas incluem: 1) Detecção imuno-histoquímica de marcadores determinantes da linhagem tumoral, alguns deles com valor preditivo. 2) FISH (fluorescence in situ hybridization) com estratégia de break-apart para genes envolvidos em translocações cromossômicas recorrentes e sondas de design locus-specific para outras alterações estruturais cromossômicas estruturais desbalanceadas (amplificações e deleções de genes ou segmentos cromossômicos). 3) Detecção em tempo real (RT) da reação em cadeia da polimerase (PCR) de transcrições de fusão resultantes de translocações cromossômicas. 4) Reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) e análise de sequenciamento de Sanger de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) como alvos para terapia. 5) Análise de fusões por sequenciamento de Sanger, ins/del como complemento de RT-PCR ou FISH (fluorescência in situ hibridização), 6) Sequenciamento de próxima geração (NGS) com um painel específico e customizado contendo todos os genes necessários para definir um tumor´ s perfil de mutação genômica para diagnóstico, estratificação de risco e prognóstico de tumores pediátricos. No entanto, o sequenciamento NGS só será aplicado naqueles casos que não puderam ser resolvidos com as estratégias anteriores ou casos com má evolução

Com base nas análises acima, será desenvolvido um algoritmo de análise integrada de acordo com as recomendações da OMS, mas adaptado às instalações da instituição. Achados moleculares serão correlacionados com dados clínicos e histológicos