Molekulare Charakterisierung genetischer Veränderungen bei soliden Tumoren bei Kindern

Hintergrund: In Argentinien machen solide Tumoren des zentralen Nervensystems (ZNS) (19 %) und nicht-ZNS-solide Tumoren (25 %) 44 % der pädiatrischen Tumoren aus. Die neue Klassifikation der Weltgesundheitsorganisation (WHO) 2016, die auch die genomische Charakterisierung umfasst, umfasst mehr als 100 ZNS-Tumorentitäten und -Unterklassen. Bei Kindern sind Tumoren der Glia-Linie (Gliome) am häufigsten und umfassen Astrozytome, Ependymome und Oligodendrogliome, während embryonale ZNS-Tumoren eine heterogene Gruppe von Tumoren des WHO-Grades IV darstellen. Pädiatrische Weichteiltumoren (STT) erschweren eine genaue Diagnose, da sich ihre morphologischen und immunphänotypischen Merkmale bei den verschiedenen histologischen Mustern überschneiden.

Das Aufkommen neuer molekularer Techniken hat zu großen Fortschritten auf dem Gebiet der soliden Tumoren geführt, insbesondere bei der molekularen Definition von Patientengruppen. Diese Tatsache ermöglicht eine maßgeschneiderte Behandlung entsprechend der Biologie des Tumors.

Insbesondere bei Kindern ist die Identifizierung von Behandlungszielen besonders wichtig, da dadurch unnötige Folgen bei einem heranwachsenden Kind vermieden werden können. Dieses Projekt ermöglicht die Verbindung zwischen Grundlagen- und klinischen Forschungsgruppen und festigt so das Ziel der grundlegenden translationalen Forschung und generiert sowohl klinisches als auch grundlegendes Wissen über die Pathogenese pädiatrischer solider Tumoren in unserem Land.

Ziel: Standardisierung und Implementierung einer umfassenden mehrstufigen molekularen Strategie unter Verwendung von Techniken mittlerer und hoher Komplexität zur Erkennung molekularer Veränderungen in primären pädiatrischen soliden Tumoren (Neuroblastom, Rhabdomyosarkom, Tumoren der Ewing-Sarkom-Familie, Weichteilsarkomen und ZNS-Tumoren (Gliome). und embryonal)), die auf die Diagnose, Prognose und/oder den Einsatz gezielter Therapien gegen molekulare Ziele angewendet werden können, um eine maßgeschneiderte Therapiemöglichkeit bereitzustellen.

Material und Methoden: Pädiatrische Fälle solider Tumoren werden prospektiv eingeschlossen. Basierend auf den Statistiken der teilnehmenden Zentren werden 100 Proben einbezogen. Von jedem Fall steht eine formalinfixierte Biopsie zur Verfügung und wenn möglich wird auch ein Fragment bei -70 °C konserviert. Klinische und Follow-up-Daten werden aus den klinischen Aufzeichnungen entnommen.

Die methodischen Ansätze umfassen: 1) Immunhistochemischer Nachweis von Markern, die die Tumorlinie bestimmen, einige davon mit prädiktivem Wert. 2) FISH (Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung) mit Break-Apart-Strategie für Gene, die an wiederkehrenden chromosomalen Translokationen beteiligt sind, und ortsspezifischen Designsonden für andere unausgeglichene strukturelle chromosomale Strukturveränderungen (Amplifikationen und Deletionen von Genen oder chromosomalen Segmenten). 3) Echtzeit-(RT)-Polymerase-Kettenreaktion (PCR)-Nachweis von Fusionstranskripten, die aus chromosomalen Translokationen resultieren. 4) Quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) und Sanger-Sequenzierungsanalyse von Einzelnukleotid-Polymorphismen (SNPs) als Ziele für die Therapie. 5) Sanger-Sequenzierungsanalyse von Fusionen, ins/del als Ergänzung zu RT-PCR oder FISH (Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung), 6) Next Generation Sequencing (NGS) mit einem spezifischen und maßgeschneiderten Panel, das alle notwendigen Gene zur Definition eines Tumors enthält s genomisches Mutationsprofil zur Diagnose, Risikostratifizierung und Prognose pädiatrischer Tumoren. Allerdings wird die NGS-Sequenzierung nur in den Fällen angewendet, die mit den vorherigen Strategien nicht gelöst werden konnten oder in Fällen mit schlechter Entwicklung

Basierend auf den oben genannten Analysen wird ein integrierter Analysealgorithmus nach WHO-Empfehlungen, jedoch angepasst an die Einrichtungen der Einrichtung, entwickelt. Molekulare Befunde werden mit klinischen und histologischen Daten korreliert