Aplicação MRD em pacientes com câncer colorretal

O ctDNA é obtido do plasma e não do soro, pois este último contém mais DNA liberado pelas células do sistema imunológico durante a coagulação. O sangue deve ser coletado em um K2EDTA ou tubo de estabilização celular (por exemplo, tubo de coleta Streck cfDNA). O isolamento do plasma deve ser realizado o mais rápido possível, no máximo 24 horas, utilizando K2EDTA (de preferência dentro de 4-6 horas) e, se forem utilizados tubos de estabilização celular, dentro de 2-7 dias, armazenado temporariamente a 4°C.

Procedimento de descarte da amostra: coletar sangue total anticoagulado, inverter suavemente para anticoagular totalmente, o fracionamento do plasma deve ser realizado o mais rápido possível, no máximo 24 horas, armazenado temporariamente a 4°C usando K2EDTA (de preferência dentro de 4-6 horas) e armazenado a -80°C por longo prazo. O sangue anticoagulante coletado é colocado em uma caixa de gelo contendo bolsas de gelo e transportado verticalmente para um laboratório centrífugo. Centrifugar a 3000 rpm a 4°C por 15 min, pegar a camada superior e alíquotar 0,5 mL/tubo em tubos de centrífuga de 1,5 mL. Criopreservado a -80 °C, 1 mL de sangue total produz aproximadamente 0,5 mL de plasma.