PED-LIPIGEN 中的 Lipa 基因突变（儿科 FH 受试者）

溶酶体酸性脂肪酶 (LAL) 由位于染色体 10q23.3-q23 的 LIPA 基因编码 由 10 个外显子组成。 LIPA mRNA（信使核糖核酸）（GenBank 登录号 NM_000235）长 2782 bp，编码 375 个残基的成熟蛋白质（GenBank 登录号 NP_000226）。 LIPA 基因的所有 10 个外显子的测序将包括 10 个 PCR（聚合酶链反应）扩增反应（对于 10 个外显子和近端启动子），然后是 20 个序列反应（正向和反向测序），使用适当的引物设计以包括内含子-外显子边界。 该分析将在项目描述中指定的约 250 个 FH 儿科受试者中进行。

测序工作将利用 2 个自动化的 8 毛细管自动 DNA 测序仪（3500 基因分析仪，Thermo Fisher Scientific，意大利蒙扎）目前在该项目所涉及的单位的实验室中可用。

在识别未报告的序列变异的情况下，将在至少 100 名正常血脂受试者的样本中评估这些突变的存在，以确定核苷酸变化是否是罕见的序列变异（具有推定的功能影响）或代表常见的多态性。 如果在编码区发现罕见变异，将使用两种不同的软件（Polyphen，http://genetics.bwh.harvard.edu/pph/ 和 Panther，http://www.pantherdb.org/）来预测突变对蛋白质的假定破坏作用。 对于内含子变体，将应用专门设计的软件自动拼接位点分析 (https://www.splice.uwo.ca/)。

推定的因果突变也将在受影响和未受影响成员的可用家庭中进行共分离测试。

为了测试变体对酶活性的影响，将使用干血斑 (DBS) 技术在属于可用家族的这些突变的携带者和非携带者中使用抑制剂 Lalistat 2 来测定 LAL 活性。