Studie bezpečnosti a účinnosti vakcíny CENV3 k ochraně proti infekci HCV (CENV3)

V této práci plánujeme studovat bezpečnost a účinnost peptidové vakcíny nazvané Cenv3 (C pro HCV, en pro obal, v pro vakcínu, 3 pro 3 epitopy). Hlavní obrysy současné studie zahrnují: 1) Zkoumání bezpečnostních parametrů během vakcinačního období včetně akutních a chronických reakcí, pokud jsou přítomny v klinické studii fáze 1 (tj. u zdravých dobrovolníků). Vakcína bude podána sc ve 3 eskalujících dávkách v přítomnosti a nepřítomnosti adjuvans. Bude také stanovena biologická dostupnost vakcíny po celou dobu trvání experimentu. 2) Hodnocení humorální a buněčné imunitní odpovědi na Cenv3 u zdravých dobrovolníků (vyšší riziko získání infekce HCV). 3) Vyhodnocení neutralizační schopnosti generovaných Ab interferovat s intracelulární replikací HCV v permisivních buněčných liniích

ii) Cíl Cílem tohoto návrhu je:

1. Zkoumání bezpečnosti a snášenlivosti kandidátní HCV peptidové vakcíny u zdravých dobrovolníků.
2. Testování imunity zprostředkované buňkami prostřednictvím odpovědí cytotoxických T lymfocytů u očkovaných zdravých subjektů (CMI).
3. Stanovení epitopově specifické odpovědi B buněk a titrů protilátek u očkovaných jedinců (humorální imunogenicita).
4. Testování virové neutralizace protilátkami proti epitopům vakcíny. (Účinnost).
5. Studium biologické dostupnosti peptidů v oběhu subjektů během vakcinace a 90 dnů po vakcinaci.

iii) Studijní populace

Subjekty s kardiovaskulárními problémy, astmatem nebo alergiemi by měly být ze studie vyloučeny. Rovněž bude vyloučen jakýkoli subjekt, který se v posledních 3 měsících zúčastnil jakékoli klinické studie experimentální medicíny. Budou zapsáni zdraví dobrovolníci včetně subjektů obou pohlaví ve věku 18-55 let. Všichni jedinci museli splnit všechna zařazovací kritéria, a to následovně: duševně a fyzicky zdraví, bez klinicky relevantních patologických nálezů v žádném z vyšetření předstudijního vyšetření včetně biochemického vyšetření krve (testy jaterních a ledvinových funkcí), diferenciálního krevního obrazu, koagulačního testu, ultrasenzitivní hladiny C-reaktivního proteinu. Subjekty by měly být schopny poskytnout písemný informovaný souhlas. Kritéria vyloučení zahrnovala těhotné nebo kojící ženy, pacienty s chronickými virovými infekcemi (např. HBV, HCV, HIV, CMV, HSV), průkazem dekompenzovaného onemocnění jater, preexistující hematurií nebo proteinurií, hladiny kryoglobulinu > 1 % nebo jiná imunologicky podmíněná onemocnění, schistosomiáza, akutní infekční onemocnění, závažné psychiatrické poruchy, současná nebo minulá anamnéza malignity a pacienti, kteří dostávali léčbu interferonem nebo jakoukoli hodnocenou léčbu hepatitidy během 3 měsíců před vstupem do studie.

iv) Souhlas Dobrovolníkům bude poskytnut písemný informační list o vakcíně a požadavcích této studie. Budou

, na oplátku dát písemný souhlas s účastí ve studii. Za účast bude subjektům vyplácen honorář. Budou jim také poskytnuty peníze na dopravu do nemocnice a zpět.

v) Nástin studie: V navrhované studii se zaměřujeme na hodnocení snášenlivosti, bezpečnosti, imunogenicity a účinnosti peptidové vakcíny Cenv3 u 112 zdravých dobrovolníků jako placebem kontrolovaná otevřená klinická studie fáze 1. Parametry snášenlivosti a bezpečnosti zahrnují klinické příznaky (akutní a chronické), biochemické testy (funkce jater a ledvin a další metabolické parametry) a hematologické testy (všechny parametry krevních buněk). Budou hodnoceny jak humorální, tak buněčné odpovědi na imunizační protokoly. Po vakcinaci budou také stanoveny neutralizační kapacity specifických Abs generovaných v reakci na vakcínu.

vi) Očkování

Příprava vakcíny bude probíhat podle zásad Správné výrobní praxe. Lyofilizované peptidy jsou vyráběny v osmiramenném multiantigenním peptidu (MAP) v komerčním zařízení specializovaném na syntézu peptidů a modifikaci struktury (např. AnaSpec USA). Peptidy budou rozpuštěny v PBS vyrobeném pro humánní použití. Celá procedura bude provedena ve sterilizovaných oblastech farmaceutického/očkovacího průmyslu (např. VACSERA, MOH Wezaret Al Zera'a ulice Agouza). Lyofilizované peptidy budou skladovány v běžné lednici, zatímco rozpuštěné peptidy budou skladovány při -80 °C jako alikvoty (v zatavených ampulích každá obsahuje 1X dávku) připravené pro injekci a přepravené do nemocnice v suchém ledu těsně před použitím. Poznámka: Tato opatření pro skladování a přepravu jsou dodržována během těchto raných fází studie. Zatímco strategie by byla upravena v komerčním měřítku, až se současný produkt ukáže jako účinný. V tomto pozdějším případě bude lyofilizovaný prášek s doporučenou dávkou zabalen do zatavených ampulí a rozpuštěn těsně před použitím. HCV peptidová vakcína Cenv3 bude injikována subkutánně ve 3 různých dávkách (1x tj. 324 ug, 2x tj. 648 ug nebo 3x 1296 ug/ 70 kg tělesné hmotnosti dospělý). Zde je třeba poznamenat, že dávka 1X se rovná vypočítané farmaceutické dávce z pokusů na myších, takže 324 ug/70 kg tělesné hmotnosti je minimální dostupná biologicky účinná dávka (MABEL). Na základě zkušeností jiných laboratoří s podáváním peptidové vakcíny člověku (Tanaka a Manns), který pro své imunizační experimenty použil až 5000 ug peptidové vakcíny. Nejvyšší dávka použitá v našem protokolu je 4X (1296 ug/ 70 kg tělesné hmotnosti), a proto je v tomto protokolu považována za hladinu bez pozorovatelného nežádoucího účinku (NOAEL). Vakcína bude podávána buď jako forma MAP (s vlastním adjuvans) nebo doplněná adjuvans (MF59) v běžném protokolu měsíčních injekcí po dobu 3 po sobě jdoucích měsíců.

vii) Odběr vzorků

Všechny postupy imunizace a odběru vzorků budou prováděny ve vzdělávací nemocnici Ahmeda Mahera (MOH). Zápis subjektu, souhlas, vakcinace, odběr vzorků a klinické pozorování po vakcinaci budou prováděny pod přísným lékařským dohledem vyškolenými kliniky v nemocnici. Subjektům bude odebráno sedm vzorků krve před první imunizací a ve dnech 30, 60, 90 (během období očkování) a ve dnech 135, 180 a 360 poté. V den 360 budou subjekty imunizovány posilovací dávkou, která se rovná původní dávce podané stejnému subjektu a 8. vzorek krve bude odebrán 30 dnů po posilovací dávce. Pokaždé bude odebráno 15 ml žilní krve. Osm ml bude použito pro separaci séra pro stanovení humorální odpovědi, neutralizační testy a biochemické testování. Sedm ml na EDTA pro CBC a separaci lymfocytů pro EliSpot test.