HYPOCHOL: Eine genetisch basierte Strategie zur Identifizierung neuer Ziele im Cholesterinstoffwechsel (HYPOCHOL)

Ziel ist es, 400 Probanden zu rekrutieren: 200 erwachsene Probanden mit familiärer Hypobetalipoproteinämie (FHBL) (Indexfälle) plus 200 weitere verwandte Probanden in mindestens 10 großen informativen FHBL-Familien, in denen keine Mutation in FHBL-Genen bekannt ist.

Die Patientenversorgung wird modifiziert: Der Patient erhält einen Hospital Anxiety and Depression (HAD)-Fragebogen (Schwerpunkt depressives Syndrom), ein Ernährungstagebuch und einige zusätzliche Blutanalysen (einschließlich genetischer Analysen).

Eines der Hauptprobleme bei der Rekrutierung von FHBL-Patienten ist die Tatsache, dass sie asymptomatisch sind und FHBL von ihren Hausärzten nicht als schwere Krankheit eingestuft wird.

Schritt 1. Ausschluss von Mutationen in ausgewählten Kandidatengenen Als ersten Ansatz zum Screening von Kandidatengenen und zum Ausschluss von Patienten mit bekannten Mutationen entwickelten die Forscher ein kundenspezifisches Design auf Basis der Haloplex™-Technologie (Agilent® Technologies), um eine Hochdurchsatz-Sequenzierung der kodierenden Regionen von 10 durchzuführen Gene, einschließlich der zuvor in FHBL (Apolipoprotein B (APOB), Proprotein-Convertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9)), Microsomal Triglyceride Transfer Protein (MTP oder ABL), Chylomikronenretentionskrankheit (CMRD), Sekretionsassoziierte, Ras-verwandte GTPase (SARA2-Gen), sowie 6 weitere Kandidatengene im Cholesterinstoffwechsel (Low Density Lipoprotein Receptor (LDLR), Sortilin (SORT1), Inducible Degrader of the LDL Receptor (IDOL), Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP), Apolipoprotein E ( ApoE) und Angiopoietin-like Protein 3 (ANGTPL3)). Alle rekrutierten Indexfälle (n = 200) werden genotypisiert, um nur diejenigen ohne Mutationen in zuvor beschriebenen Genen auszuwählen, was ungefähr 50 % unserer Indexfallkohorte entspricht.

Schritt 2. Identifizierung informativer Familien und Exomsequenzierung Bei Patienten ohne identifizierte Mutationen führen die Prüfärzte ein familiäres Screening durch, um andere Fälle von FHBL unter Verwandten der Probanden zu identifizieren. Eine Analyse der Nüchtern-Plasmalipidparameter (Gesamtcholesterin (TC), High-Density-Lipoprotein-Cholesterin (HDL-C), Low-Density-Lipoproteine ​​(LDL-C) und Triglyceride (TG)) wird für jeden verwandten durchgeführt. Betroffene Personen werden anhand eines spontanen LDL-C < 80 mg/dl und/oder apoB < 50 mg/dl bestimmt. Im Gegensatz dazu weisen nicht betroffene Probanden LDL-C > 80 mg/dl und/oder ApoB > 50 mg/dl auf.

Bei großen Familien werden die Ermittler dann die Sequenzierung des gesamten Exoms und die Kopplungsanalyse kombinieren, um jede neue genetische Variante zu identifizieren, die wahrscheinlich FHBL erklärt. Abhängig vom Stammbaum der Familie wird bei 2 bis 5 Patienten pro Familie eine Sequenzierung des gesamten Exoms (WES) durchgeführt. Alle Verwandten werden für die Kopplungsanalyse genotypisiert.

Parallel zu diesem genetischen Ansatz wird eine regionale epidemiologische Analyse durchgeführt, um einige geografische Cluster mit einer hohen Prävalenz der Krankheit zu identifizieren, wie sie im Projekt mit dem Namen VaCaRMe (für Vascular and Cardiac, Respiratory and Metabolic überwundene Krankheiten) entwickelt wurden.

Ein weiteres Ziel, basierend auf einer umfassenden Phänotypisierung von FHBL-Patienten, besteht darin, die Sicherheit von sehr niedrigem LDL-C zu untersuchen und einige Genotyp-Phänotyp-Korrelationen bei Patienten mit FHBL-Population durchzuführen.“