ADN circulante en NSCLC tratado quirúrgicamente

La biopsia líquida de plasma es una herramienta de diagnóstico no invasiva que está emergiendo rápidamente y que podría usarse como sustituto de la biopsia tumoral o la actividad de la enfermedad. El ADN circulante libre de células (cfDNA) es un fragmento corto de ADN de doble cadena que está presente en la sangre. Se requieren técnicas específicas de mutación ultrasensibles basadas en el análisis de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar mutaciones y alteraciones en las células tumorales circulantes. Los primeros estudios basados ​​en un pequeño número de pacientes indican que los análisis de ctDNA podrían usarse para pruebas moleculares, detección de cáncer, sustitución de la carga o actividad tumoral y seguimiento del tratamiento en tumores sólidos.

En el estudio actual, se investigará el papel del ctDNA del plasma en pacientes con NSCLC en etapa temprana tratados quirúrgicamente. El objetivo de los investigadores es recopilar una cohorte prospectiva de cien pacientes con muestras preoperatorias y de seguimiento, así como muestras de tejido de diagnóstico. Los investigadores plantean la hipótesis de que las muestras longitudinales de ctDNA podrían usarse como marcador de pronóstico para la recurrencia y la supervivencia. Encontrar ctDNA posquirúrgico positivo podría ayudarnos a identificar a los pacientes que se beneficiarían de la quimioterapia adyuvante antes de la recurrencia clínica.

Diseño del estudio y consideraciones éticas

Este es un estudio prospectivo, no intervencionista, de un solo brazo que se llevará a cabo en colaboración con Helsinki Biobank. Se estima que una cohorte de 100 pacientes proporcionará un tamaño de muestra amplio, ya que el 30-40% desarrollará una recurrencia durante los 5 años de seguimiento. Se ha realizado un acuerdo preliminar con Helsinki Biobank sobre la recogida y almacenamiento de muestras. No habrá citas de estudio adicionales ya que todas las visitas de control y las muestras de estudio se programan de acuerdo con el protocolo clínico normal. Los pacientes serán reclutados del 1.5.2019 al 31.12.2020. Los pacientes reclutados proporcionarán un consentimiento informado por escrito para este estudio y un consentimiento del Biobanco de Helsinki que cubre plasma y muestras quirúrgicas. Los participantes pueden retirar el consentimiento en cualquier momento del estudio. Las muestras del Biobanco se tomarán simultáneamente con las muestras clínicas, minimizando el daño adicional a los participantes. Se ha otorgado un permiso de la junta de revisión de la institución del Hospital Universitario de Helsinki (HUS) (HUS 60/2019) y una declaración ética (455/2019). El estudio se llevará a cabo de conformidad con la Declaración de Helsinki.

Pacientes

Los pacientes son reclutados antes de la cirugía de la reunión preoperatoria del equipo multidisciplinario (MDT). El criterio de inclusión en este estudio es NSCLC histológicamente confirmado elegible para tratamiento quirúrgico e ingenuo para tratamientos oncológicos sistémicos con tejido incluido en parafina fijado con formalina o muestra de tejido fresco congelado disponible.

Los datos clínicos del paciente se recopilarán de registros médicos electrónicos (EMR) en cada momento (p. preoperatorio, operatorio, seguimiento). Cada paciente es evaluado en reuniones de MDT antes y después de la cirugía, donde se determina tanto el estadio clínico como patológico. Además, la proporción de consolidación radiológica/tumor se calculará a partir de tomografías computarizadas (TC) preoperatorias. Estos datos serán transferidos a una base de datos electrónica segura y certificada (Granitics Unify Med) a la que solo tienen acceso los investigadores del grupo.

Recolección de muestras de sangre y tejido.

Las muestras de sangre y tejido se tomarán simultáneamente con las muestras clínicas. El objetivo de los investigadores es recolectar muestras de tejido extraídas quirúrgicamente, así como muestras de cfDNA preoperatorias y de seguimiento de todos los pacientes. Además de las muestras quirúrgicas, se recolectarán muestras de tejido de lesiones metastásicas, incluidas muestras de autopsia en pacientes fallecidos. Si aún no se ha tomado, la muestra de sangre estándar del Biobanco se tomará simultáneamente con las muestras preoperatorias.

Las muestras de plasma se tomarán en el momento de las muestras clínicas de sangre del paciente. Se tomará una muestra preoperatoria 1-2 días antes de la cirugía. La primera muestra de seguimiento postoperatorio se tomará en la visita quirúrgica 4-6 semanas después de la operación. La segunda y tercera muestras de seguimiento se tomarán a los 6 y 12 meses durante la visita de seguimiento clínico. En cada punto de tiempo, las muestras de cfDNA se recolectarán en tubos de recolección especializados por duplicado que contienen fijadores para estabilizar el ADN de la fragmentación (2 x 10 ml Streck cfDNA BCT). La muestra de sangre se centrifugará para extraer el plasma. Las muestras de plasma y tejido se almacenarán a -80 grados centígrados en el Biobanco de Helsinki.

Los resultados del estudio Las mutaciones preoperatorias de ctDNA se compararán con criterios de valoración clínicamente importantes, como la supervivencia libre de enfermedad, el tamaño del tumor, la histología, el estadio TNM y la supervivencia general. La recidiva clínica del cáncer se obtendrá a partir de muestras radiológicas o de tejido tumoral. La supervivencia libre de enfermedad se evaluará desde la cirugía hasta la recurrencia de la enfermedad en las reuniones de MDT o la muerte. La supervivencia global se evalúa desde la cirugía hasta la muerte por cualquier causa.

Análisis genético

El análisis de ctDNA cuantitativo y específico de la mutación se realizará a través del panel del genoma del exoma tumoral/somático que incluye un panel de 23.000 genes con 50 millones de bases. El aislamiento del ADN de la línea germinal se realizará a partir de la capa leucocitaria extraída de la muestra de sangre de los pacientes (B-Bio-0). En primer lugar, para lograr verdaderas mutaciones somáticas, la variación de la línea germinal se elimina del ctDNA. En segundo lugar, el ctDNA se comparará con las mutaciones del ADN del tejido tumoral para excluir resultados falsos positivos. En tercer lugar, se utilizarán mutaciones similares o nuevas recogidas de muestras de seguimiento para detectar enfermedad residual posquirúrgica o recurrencia del cáncer.

La secuenciación se realizará en colaboración con el Instituto de Medicina Molecular de Finlandia (FIMM), con su panel de genes patentado.