El activador de células T del estudio de la matanza celular ("tacle") en " ("TACKITON)

Fondo:

Las terapias antirretrovirales combinadas (CART) han transformado el VIH en una condición de salud manejable crónica para muchos PLWH.

A pesar del potente CART, la gran mayoría de PLWH tiene residual de viremia que permanece por debajo del límite de detección de ensayos clínicos actuales de 20 copias/ml de plasma, pero a menudo puede ser detectado mediante ensayos altamente sensibles. Varios estudios informan que el PLWH que cumple con CART, sin mutaciones de resistencia a los medicamentos, tiene una viremia de bajo nivel detectable continua (también conocida como viremia no supresible, NSV), generalmente de 20-400 copias/ml, que varían en frecuencia de 1 en 250 a 9% y 10%. En Ontario, en los últimos dos años, el 11.9% de PLWH tenía dos o más valores consecutivos de Viremia de bajo nivel (LLV) (Comunicación personal Vanessa Tran, Ontario Public Health Labs). Aunque se siente que la viremia de bajo nivel en el carro compatible no refleja el fracaso del tratamiento, existe evidencia de que puede no ser clínicamente insignificante. Estudios recientes de grandes cohortes predicen una posibilidad de insuficiencia virológica de 2-3 veces y aumentaron la mortalidad de todas las causas y los eventos sin ayuda con LLV. White Et. Alabama. demostró que el LLV detectable se debe a la expansión de clones que contienen virus defectuoso y competente competente, que proliferan probablemente en respuesta a los antígenos. Por lo tanto, los individuos con LLV probablemente tienen poblaciones muy grandes de clones proliferados en sus embalses. Si este mayor nivel de producción diaria de virus sostiene la inflamación y la activación inmune es poco conocido. Además, la importancia clínica a corto plazo de estos hallazgos no está claro, sin embargo, estos individuos representan un grupo único para estudiar más estrategias de cura que disminuyen el tamaño del depósito.

Observaciones recientes, sugieren que algunos NNRTI (especialmente Efavirenz) podrían reutilizarse para matar estas células productoras de virus. La enzima de proteasa del VIH es parte de un precursor de proteína GAG-POL más grande que se produce como un monómero inactivo en el citoplasma de las células infectadas después de la transcripción del VIH. Para que la proteasa del VIH esté activa, debe dimerizar, y esta dimerización solo ocurre dentro de la partícula del virus que ha bañado la célula, lo que da como resultado partículas virales infecciosas maduras. Se ha demostrado que algunos NNRTS como Efavirenz pueden inducir la dimerización intracelular de GAG-POL y la activación prematura de la proteasa en el citosol antes de la gemación, lo que puede desencadenar el inflamasoma de la proteína Card8 (dominio del dominio de reclutamiento de caspase 8), lo que resulta en la muerte de HIV-1- Productores de células a través de la piroptosis. Este proceso ocurre cuando el compuesto se une al dominio RT de la poliproteína GAG-POL, lo que lleva a un cambio conformacional que induce su dimerización dentro del citoplasma celular en lugar de en la partícula del virus, y la consiguiente actividad autocatalítica de la enzima proteasa. Por lo tanto, EFV puede inducir la dimerización de GAG-POL en el citoplasma, que desencadena la detección de Card8 y la activación de inflamasoma intra-citoplasmática La activación de proteasa-CARD8 estaría bloqueada por la presencia de inhibidores de la proteasa (p. Ej. indinavir). Los datos preliminares del laboratorio Simonetti (uno de los co-investigadores) que usan células T CD4+ de personas en CART que experimentan una viremia no compresiva, pero de bajo nivel, han demostrado que las concentraciones micromolares de efavirenz (EFV) pueden reducir significativamente la producción de virus en una fuerte T-T. Activación celular por estimulación CD3/CD28, debido a la detección de Card8 de la actividad de proteasa del VIH. En otras palabras, estas células infectadas por virus fueron asesinadas en presencia de EFV durante la activación inmune. En los experimentos de control, con la adición del inhibidor de la proteasa lopinavir, el efecto de EFV se anula por completo. Los experimentos se realizaron con EFV en 5um, que se puede alcanzar en plasma en una gran fracción de individuos con la dosis completa recomendada (600 mg Q.D.). Estudios de farmacocinética anteriores mostraron que la EFV alcanza la concentración plasmática por encima de la EC50 requerida para su efecto de asesinato (1um) y alcanza concentraciones aún más altas en los tejidos. El trabajo reciente informó moléculas similares a NNRTI con actividad antiviral comparable a EFV pero una potencia significativamente mayor en la inducción de la dimerización y la muerte mediada por CARD8. Sin embargo, tales compuestos todavía se encuentran en las primeras etapas de la investigación preclínica y no se ha explorado su perfil y actividad farmacocinética in vivo. Este efecto, de matar células infectadas por VIH por piroptosis después de la detección de Card8 se ha denominado tachuela (activador objetivo de la muerte celular). EFV representa la mejor molécula de tachuela para probar si el Card8-InflammaSome puede aprovecharse como una opción terapéutica en las personas que viven con VIH en Art EFV se reconoce como el compuesto NNRTI aprobado por la FDA más prometedor y potente para este propósito. En el estudio propuesto, la intensificación del CART con EFV se usa para la detección de Card8 inducida y no para bloquear la replicación viral.

Hipótesis:

Para PLWH, que se adhieran al Cart, sin resistencia documentada a su carrito actual, o EFV, y que han documentado una viremia persistente no compresible (NSV), la adición a corto plazo de Efavirenz, como una molécula de táctil [activador dirigido de células que mata celular ], reducirá la carga viral de ARN VIH-1 en plasma.

La viremia del VIH en plasma del punto final primario se comparará al inicio (visite 2) después de 8 semanas de EFV. (Visite 7) puntos finales secundarios

VIH Reservas virales:

QVOA (Ensayo de consumo de crecimiento competente de replicación) al inicio y a los 2 meses de ensayo de ADN proviral intacto de EFV al inicio del estudio, durante y después de 2 meses de ARN de VIH asociado a células EFV al inicio, durante y después de 2 meses de EFV

Activación inmune:

Marcadores de activación inmune y muerte celular en plasma (línea de base y 2 meses):

CRP, LDH, IL-1 Beta, TNF, IL-6, Gasdermin D, Th1 y Th2 Citocinas y marcadores de quimiocinas de la activación de células T (CD4 y CD8) medida al inicio y 2 meses a través de la citometría de flujo.

Las células T respuestas a las proteínas del VIH al inicio y 2 meses.

Diseño del estudio:

Este es un estudio prospectivo y no aleatorizado en el que cada sujeto inscrito actuará como su propio control antes y después de la introducción de dos meses de Efavirenz como una molécula de tachuela. El estudio será en un solo sitio, en Maple Leaf Clinic en Toronto, Unity Health St. Michael's Hospital y la Universidad de Toronto. Después de la inscripción, la duración del estudio es de 20 semanas. Todos los sujetos serán reclutados para Maple Leaf Clinic, Toronto. Los dibujos de sangre se producirán en la clínica de hoja de arce. Los procedimientos de leucaféresis para estudiar más intensamente los depósitos de virus y la inmunidad serán opcionales, y ocurrirán al inicio y 8 semanas. La línea de base se define como el tiempo para tener sorteos de sangre de línea de base, y/o leucaféresis, y las personas comenzarán en EFV 600 mg PO una vez al día durante 8 semanas, para comenzar el día siguiente. Los participantes serán identificados antes de la visita de referencia aproximadamente a las 4 semanas antes de la línea de base para garantizar la elegibilidad. Tenemos la intención de inscribir a 14 participantes. En la visita de -4 semanas (visita 1), el farmacéutico del estudio revisará todos los medicamentos concomitantes, el cumplimiento, la revisión del régimen de arte actual y el régimen de arte propuesto con la adición de dosis completa EFV. Efecto secundario potencial/toxicidades, especialmente los efectos neurológicos conocidos pero reversibles de EFV, y se discutirán el manejo de ellos. En este momento, se obtendrá una carga viral para confirmar la viremia persistente de bajo nivel. Al inicio del estudio, (Tiempo 0), si la VL anterior mostró LLV, se realizarán los siguientes ensayos: carga viral del VIH, QVOA, IPDA para mediciones de yacimientos de VIH, ARN de VIH asociado a células, calificadores de células T de la activación inmune, VIH, VIH, VIH, VIH, VIH, ARN de VIH asociado a las células, plasma y marcadores de células T de activación inmune, VIH, VIH, VIH, VIH Inmunidad de células T Al inicio en lugar de un sorteo de sangre de 70cc, se ofrecerá sujetos para participar en leucaféresis (opcional) que proporcionará números de células más grandes para interrogar mejor el depósito del VIH. Las visitas posteriores a la 1 semana (V3), 3 semanas (V4), 5 semanas (V5) y 7 semanas (V6) seguirán la carga viral de plasma y los depósitos por IPDA. A las 8 semanas (V7), los participantes descontinuarán EFV, y se analizarán la carga viral, los depósitos de VIH, los marcadores de plasma y células de activación inmune e inmunidad de células T. A los sujetos se les ofrecerá leucaféresis (opcional) para caracterizar mejor el depósito del VIH y los estudios inmunes de células T. Las visitas de seguimiento medirán las cargas y los depósitos virales en plasma en las semanas 9 (V8), 12 (V9) y 16 (V10). En todas las visitas, los participantes serán revisados ​​por posibles efectos secundarios/toxicidades, incluidos los síntomas neuropsiquiátricos y la adherencia, y la CRF revisada. Los posibles efectos secundarios se investigarán con los extractos de sangre y se tratan en consecuencia (por ejemplo, erupción cutánea, proporcionan antihistamínicos, crema HC, +/- EFV de suspensión si es moderada a severa por el médico del estudio (C. Kovacs). Todas las visitas tendrán lugar +/- 3 días del punto de tiempo indicado.

Muestreo. La sangre se recolectará utilizando tubos SST/EDTA/ACD para los diversos ensayos. Al inicio y 8 semanas, si los sujetos se someten a leucaféresis, solo se realizará un tubo de sangre de 5 ml para la carga viral en esos puntos de tiempo. Los volúmenes de sangre son los siguientes: visita de detección (25 ml), 75 ml en todas las demás visitas (si no se realiza la leucaféresis). En cada visita, la evaluación se realiza de efectos secundarios de EFV, se evaluarán medicamentos nuevos o continuos, incluido el régimen de CART y el cumplimiento. Para garantizar la seguridad inmune, los recuentos de CD4 se realizan en la detección, WK 8 y 16.

Análisis estadístico:

Los análisis estadísticos se realizarán con el apoyo del núcleo de bioestadística y epidemiología de Johns Hopkins CFAR (BEM) y el CTN; Las diferencias entre los puntos de tiempo en toda la cohorte se compararán utilizando la prueba de rango de rango Wilcoxon o Kruskal-Wallis. El ARN del VIH-1 dentro del participante (transformado log), el ADN, los cambios entre los puntos de tiempo se estimarán con los modelos de regresión lineal específicos de los participantes y se compararán con la hipótesis nula de no cambios utilizando la prueba de rango firmado de Wilcoxon. El mismo enfoque se aplicará a marcadores solubles de activación inmune e inflamación.

Resultados e implicaciones esperados El depósito del VIH no se descompone de forma natural o usa el carrito. La investigación propuesta abordará los aspectos de traslación de la persistencia del VIH con implicaciones inmediatas para la atención clínica. Aprovechar la activación del inflamasoma CARD8 con EFV tiene el potencial de eliminar los provirus transcripcionalmente activos GAG/Pol como causa de LLV, que actualmente tiene opciones terapéuticas limitadas, dado que los agentes antirretrovirales actuales no afectan la expresión del virus. La reducción de la LLV podría liberar a los médicos y pacientes de intentos equivocados y potencialmente dañinos de cambio de régimen injustificado, ansiedad por la falla de drogas o los riesgos personales de las transmisiones a las parejas sexuales. El potencial para reducir una causa significativa y tratable de inflamación adversa recientemente identificada y activación inmune crónica tiene profundas implicaciones para mejorar la incidencia y los resultados de enfermedades concomitantes prevenibles. Si estos esfuerzos avanzan con la disciplina, la reducción del marcador de inflamación podría usarse en la cascada de atención clínica de tratamiento con VIH por primera vez. Dado que gran parte del depósito refleja la expansión de clones infectados, dicha estrategia puede eliminarlos. Recientemente, los estudios de cura han experimentado la vacilación de la participación de las comunidades reacios a aceptar las interrupciones en el carro en la investigación. Este diseño podría proporcionar garantía de seguridad a los voluntarios al tiempo que satisface los requisitos de los investigadores para su dependencia de señales verificables, como IPDA y VQOA o reducción de LLV. El objetivo de Tack Therapeutics es dos veces: 1) reducir sustancialmente el depósito de los virus competentes de replicación; y 2) para reducir la estimulación antigénica continua de clones de células infectadas de latencia que contienen intervenciones de virus transcripcionalmente activos pero defectuosos que podrían convertir a estos individuos en indetectables sería beneficioso.

Reclutamiento Un total de 26 participantes serán reclutados para el estudio.