L'attivatore delle cellule T di celle killing ("tack") su "Studio ("TACKITON)

Sfondo:

Le terapie antiretrovirali combinate (CART) hanno trasformato l'HIV in una condizione di salute gestibile cronica per molti PLWH.

Nonostante il potente carrello, la stragrande maggioranza del PLWH ha residuo di viremia che rimane al di sotto del limite di rilevazione degli attuali saggi clinici di 20 copie/ml di plasma ma può spesso essere rilevata da saggi altamente sensibili. Numerosi studi riportano che il PLWH conforme al CART, senza mutazioni di resistenza ai farmaci, ha viremia a basso livello rilevabile in corso (indicato anche come viremia non invocabile, NSV), di solito da 20-400 copie/ml, che vanno in frequenza da 1 a 250 a 250 a 250 a 250 a 250 9% e 10%. In Ontario, negli ultimi due anni, l'11,9% di PLWH aveva due o più valori consecutivi di viremia di basso livello (LLV) (comunicazione personale Vanessa Tran, Ontario Public Health Labs). Sebbene si ritiene che la viremia di basso livello sul carrello conforme non rifletta il fallimento del trattamento, ci sono prove che potrebbe non essere clinicamente insignificante. Recenti studi di grandi coorti prevedono una possibilità di 2-3 volte di insufficienza virologica e aumentano tutti gli eventi di mortalità e non AIDS con LLV. White ET. al. ha mostrato che LLV rilevabile è dovuto all'espansione di cloni contenenti virus competenti sia difettosi che di replica, che proliferano probabilmente in risposta agli antigeni. Pertanto, gli individui con LLV, probabilmente hanno popolazioni molto grandi di cloni proliferati nei loro serbatoi. Se questo livello più elevato di produzione quotidiana del virus sostiene l'infiammazione e l'attivazione immunitaria è scarsamente compresa. Inoltre, il significato clinico a breve termine di questi risultati non è chiaro, tuttavia, questi individui rappresentano un gruppo unico per studiare ulteriormente le strategie di cura che riducono la dimensione del serbatoio.

Recenti osservazioni, suggeriscono che alcuni NNRTI (in particolare Efavirenz) potrebbero essere riproposti per uccidere queste cellule che producono virus. L'enzima per la proteasi dell'HIV fa parte di un precursore della proteina GAG-POL più grande che viene prodotto come monomero inattivo nel citoplasma delle cellule infette dopo la trascrizione dell'HIV. Affinché la proteasi dell'HIV sia attiva, deve dimerizzare e questa dimerizzazione avviene solo all'interno della particella virus che ha gettato fuori la cellula, il che si traduce in particelle virali mature e infettive. È stato dimostrato che alcuni NNRTI come Efavirenz possono indurre dimerizzazione intracellulare GAG-Pol e l'attivazione prematura della proteasi nel citosol prima del germogliamento, che può innescare il Card8 (Proteina di reclutamento Caspasi 8) producendo cellule tramite piroptosi. Questo processo si verifica quando il composto si lega al dominio RT della poliproteina GAG-POL, portando a un cambiamento conformazionale che induce la sua dimerizzazione all'interno del citoplasma cellulare piuttosto che nella particella del virus e la conseguente attività autocatalitica dell'enzima proteasi. Pertanto, l'EFV può indurre la dimerizzazione di GAG-Pol nel citoplasma, che innesca il rilevamento Card8 e l'attivazione infiammasoma di attivazione intra-citoplasmatica-CARD8 sarebbero bloccati dalla presenza di inibitori della proteasi (ad es. indinavir). I dati preliminari del laboratorio Simonetti (uno dei co-investigatori) che utilizzano cellule T CD4+ di persone sul carrello che sperimentano non soppressive, ma la viremia di basso livello, hanno dimostrato che le concentrazioni micromolari di Efavirenz (EFV) possono ridurre significativamente la produzione di virus forte Attivazione cellulare mediante stimolazione CD3/CD28, a causa del rilevamento Card8 dell'attività della proteasi dell'HIV. In altre parole, queste cellule infette da virus sono state uccise in presenza di EFV durante l'attivazione immunitaria. Negli esperimenti di controllo, con l'aggiunta dell'inibitore della proteasi Lopinavir, l'effetto dell'EFV è completamente abrogato. Sono stati condotti esperimenti con EFV al 5UM, che può essere raggiunto nel plasma in una grande frazione di individui con la dose completa raccomandata (600 mg Q.D.). Precedenti studi di farmacocinetica hanno dimostrato che l'EFV che raggiunge la concentrazione plasmatica al di sopra della EC50 richiesta per il suo effetto di uccisione (1UM) e raggiunge concentrazioni ancora più elevate nei tessuti. Recenti lavori hanno riportato molecole simili a NNRTI con attività antivirale comparabile con EFV ma potenza significativamente più elevata nell'indurre la dimerizzazione e l'uccisione mediata da Card8. Tuttavia, tali composti sono ancora nelle prime fasi dell'indagine pre-clinica e il loro profilo farmacocinetico e attività in vivo non sono stati esplorati. Questo effetto, di uccidere le cellule infette da HIV dalla piroptosi dopo il rilevamento di Card8 è stato definito Tack (attivatore mirato dell'uccisione cellulare). EFV rappresenta la migliore molecola di virata per verificare se la Card8-inflammasome può essere sfruttata come opzione terapeutica nelle persone che vivono con l'HIV su ART EFV è riconosciuto come il composto NNRTI approvato dalla FDA più promettente e potente per questo scopo. Nello studio proposto, l'intensificazione del carrello con EFV viene utilizzata per il rilevamento di Card8 indotto e non per bloccare la replicazione virale.

Ipotesi:

Per PLWH, che sono aderenti al carrello, senza resistenza documentata al loro carrello attuale, o EFV, e che hanno documentato la viremia persistente non sospepibile (NSV), l'aggiunta a breve termine di Efavirenz, come molecola di virata [attivatore mirato all'uccisione di cellule di cellule ], ridurrà la carica virale di RNA HIV-1 al plasma.

La viremia dell'HIV plasmatica endpoint primaria verrà confrontata al basale (visita 2) dopo 8 settimane di EFV. (Visita 7) Endpoint secondari

Bacini virali dell'HIV:

QVOA (replica del test di estensione del virus competente) al basale e a 2 mesi di test del DNA provirale intatto EFV al basale, durante e dopo 2 mesi di RNA HIV associato alle cellule EFV al basale, durante e dopo 2 mesi di EFV

Attivazione immunitaria:

Marcatori di attivazione immunitaria e morte cellulare nel plasma (basale e 2 mesi):

CRP, LDH, IL-1 Beta, TNF, IL-6, Gasdermin D, Th1 e Th2 Marker e chemochine dell'attivazione delle cellule T (CD4 e CD8) misurata al basale e 2 mesi tramite citometria a flusso.

Le cellule T rispondono alle proteine ​​HIV al basale e 2 mesi.

Progettazione dello studio:

Questo è uno studio prospettico e non randomizzato in cui ogni soggetto arruolato fungerà da proprio controllo prima e dopo l'introduzione di due mesi di Efavirenz come molecola. Lo studio sarà in un unico sito, presso la Maple Leaf Clinic a Toronto, Unity Health St. Michael's Hospital e University of Toronto. Dopo l'iscrizione, la durata dello studio è di 20 settimane. Tutti i soggetti saranno reclutati alla Maple Leaf Clinic, Toronto. I disegni di sangue si verificheranno presso la clinica delle foglie di acero. Le procedure di leukaferesi per studiare più intensamente i serbatoi e l'immunità virus saranno opzionali e si verificheranno al basale e 8 settimane. La linea di base è definita come il tempo per avere disegni di sangue di base e/o leukaferesi e gli individui saranno avviati su EFV 600 mg PO una volta al giorno per 8 settimane, per iniziare il giorno successivo. I partecipanti saranno identificati prima della visita di base a circa 4 settimane prima della linea di base per garantire l'ammissibilità. Intendiamo iscrivere 14 partecipanti. Alla visita di -4 settimane (visita 1), il farmacista dello studio esaminerà tutti i farmaci concomitanti, la conformità, la revisione del regime artistico attuale e il regime artistico proposto con l'aggiunta di EFV a dose completa. Verranno discussi potenziali effetti collaterali/tossicità - Sosterranno gli effetti neurologici noti e reversibili di EFV. E la gestione di essi. In questo momento, verrà ottenuto un carico virale per confermare la viremia persistente di basso livello. Al basale, (tempo 0), se il precedente VL mostrava LLV, verranno eseguiti i seguenti test: carico virale dell'HIV, QVOA, IPDA per misurazioni del serbatoio dell'HIV, RNA HIV associato alle cellule, marcatori di cellule plasmatiche e T di immunita Immunità alle cellule T. Al basale anziché a un prelievo di sangue da 70 cc, i soggetti saranno offerti per partecipare alla leukaferesi (opzionale) che forniranno numeri di cellule più grandi per interrogare meglio il serbatoio dell'HIV. Visite successive a 1 settimana (V3), 3 settimane (V4), 5 settimane (V5) e 7 settimane (V6) seguiranno il carico virale e i bacini virali di IPDA. A 8 settimane (V7), i partecipanti interromperanno l'EFV e il carico virale, i bacini HIV, i marcatori plasmatici e cellulari dell'attivazione immunitaria e l'immunità delle cellule T verranno analizzati. Ai soggetti verrà offerta la leukaferesi (opzionale) per caratterizzare meglio gli studi immunitari del serbatoio dell'HIV e delle cellule T. Le visite di follow -up misureranno carichi virali al plasma e serbatoi alle settimane 9 (V8), 12 (V9) e 16 (V10). A tutte le visite, i partecipanti saranno rivisti per potenziali effetti collaterali/tossicità, compresi i sintomi neuropsichiatrici e l'adesione e la CRF rivista. I potenziali effetti collaterali saranno studiati con i disegni di sangue e trattati di conseguenza (ad esempio eruzione cutanea, forniscono antistaminici, crema HC, +/- interrompere l'EFV se da moderato a grave dal medico di studio (C. Kovacs). Tutte le visite avranno luogo +/- 3 giorni del punto temporale indicato.

Campionamento. Il sangue verrà raccolto utilizzando tubi SST/EDTA/ACD per i vari saggi. Al basale e 8 settimane, se i soggetti subiscono leukaferesi, verrà eseguito solo un tubo da 5 ml di sangue per la carico virale in quei punti temporali. I volumi di sangue sono i seguenti: Visita di screening (25 mL), 75 ml in tutte le altre visite (se leukaferesi non è stata eseguita). Ad ogni visita, verrà valutato la valutazione di effetti collaterali EFV, farmaci nuovi o continui, incluso il regime CART e l'adesione. Per garantire la sicurezza immunitaria, i conteggi CD4 vengono eseguiti allo screening, WK 8 e 16.

Analisi statistica:

Saranno condotte analisi statistiche con il supporto del Johns Hopkins CFAR Biostatistics and Epidemiology Core (BEM) e del CTN; Le differenze tra i punti temporali nell'intera coorte verranno confrontate usando il test di sumum di rango di Wilcoxon o Kruskal-Wallis. RNA di HIV-1, DNA, DNA, DNA, DNA, DNA, variazioni tra i punti temporali, all'interno dei modelli di regressione lineare specifica per i partecipanti e confrontati con l'ipotesi nulla di nessun cambiamento usando il test di livello firmato Wilcoxon. Lo stesso approccio verrà applicato a marcatori solubili di attivazione immunitaria e infiammazione.

Risultati e implicazioni previste Il serbatoio dell'HIV non riesce a decadere in modo naturale o utilizzando CART. La ricerca proposta affronterà gli aspetti traslazionali della persistenza dell'HIV con implicazioni immediate per l'assistenza clinica. L'attivazione dell'inflammasoma Card8 con EFV ha il potenziale per eliminare i provirus trascrizionalmente attivo GAG/POL come causa di LLV, che al momento ha opzioni terapeutiche limitate, dato che gli attuali agenti antiretrovirali non influenzano l'espressione del virus. Ridurre LLV potrebbe liberare clinici e pazienti da tentativi fuorviati e potenzialmente dannosi di cambio di regime ingiustificato, ansia di insufficienza farmacologica o rischi personali di trasmissioni ai partner sessuali. Il potenziale per abbassare una causa significativa e curabile di infiammazione avversa di recente identificazione e l'attivazione immunitaria cronica ha profonde implicazioni per migliorare l'incidenza e gli esiti di malattie concomitanti prevenibili. Se questi sforzi avanzano con la disciplina, la riduzione del marker di infiammazione potrebbe essere utilizzata per la prima volta nella cascata di cure cliniche per il trattamento dell'HIV. Dato che gran parte del serbatoio riflette l'espansione di cloni infetti, tale strategia potrebbe essere in grado di eliminarli. Recentemente studi di cura hanno sperimentato l'esitazione della partecipazione da comunità riluttanti ad accettare le interruzioni del carrello nella ricerca. Questo progetto potrebbe fornire la sicurezza ai volontari soddisfacendo i requisiti degli investigatori per fare affidamento su segnali verificabili, come IPDA e VQOA o riduzione di LLV. L'obiettivo di Tack Therapeutics è due volte: 1) per ridurre sostanzialmente il serbatoio dei virus competenti di replica; e 2) ridurre la stimolazione antigenica in corso da cloni di cellule di infezione latente che contengono interventi virus trascrizionalmente attivi ma difettosi che potrebbero convertire questi individui in non rilevabili sarebbe utile.

Recruitment Un totale di 26 partecipanti verranno reclutati per lo studio.