A 25-OH D-vitamin-kiegészítés immunmoduláló hatásai (SCLERODERMA)

A tanulmány a Helyi Kutatási és Etikai Bizottság előzetes engedélyével készül. Az egészségügyi szolgáltatásainkra jogosult, szűrővizsgálati kritériumoknak megfelelő betegeket bevonjuk.

Az adatbázisunkban szereplő sclerodermás betegeket telefonon hívjuk meg a vizsgálatban való részvételre. Azok a betegek, akik megfelelnek a szűrési kritériumoknak és elfogadják a vizsgálatban való részvételt, időpontot kapnak.

Az interjú napján megkapják a beleegyező nyilatkozatot. Az aláírást követően felkérik őket, hogy töltsék ki a klinikai feljegyzést, és szérummintákat gyűjtöttek a biokémiai meghatározásokhoz, beleértve a D-vitamin állapotot is.

Miután a betegek befejezték a kezdeti értékelést, két héttel később újabb látogatást terveznek. A hypovitaminosis D eredménnyel rendelkező betegeket véletlenszerűen két csoport egyikébe kell besorolni: 1. csoport: D3-vitamin-pótlás és 2. csoport: étrendi ajánlások. Két csoport kapott utasítást az étrendi ajánlások betartására vagy a D3-vitamin pótlására és az orvosi mérések elvégzésére. Ezen túlmenően a kutatók között olyan SSc-betegek is részt vettek, akiknek D-vitamin-elég volt, és egy másik egészséges donort is.

A második vizit alkalmával (négy héttel később) a klinikai adatokat és a következő paramétereket rögzítjük: kalcium, foszfor, mellékpajzsmirigy hormon quimioluniscencia 25-hidroxi-D-vitamin szérum állapot ELISA-val, intracelluláris citokin (IL-2, INF-γ, IL- 4 és IL-10) termelése Th1, Th2 és Treg limfocitákból áramlási citometriával.

1. csoport. 5000 UI D3-vitamin napi orális adagja 4 héten keresztül.

2. csoport. Diétás ajánlások a normál napi D-vitamin bevitelre vonatkozó ajánlások szerint 4 héten keresztül.

Ezen túlmenően, a vizsgálók összehasonlítóként figyelembe veszik a D-vitamin elégséges SSc csoportját és az egészséges donorokat.

Minden csoport írásos utasítást kap a droghasználattal kapcsolatban. A kiegészítések végén egy újabb látogatást terveznek a kezelés megfelelőségének ellenőrzésére (a fennmaradó kapszulát számolják), és a betegek elvégzik a második klinikai értékelést, valamint a kalcium, foszfor, mellékpajzsmirigyhormon quimioluniscencia 25-hidroxi-D-vitamin szérum állapotát ELISA-val, intracelluláris citokin (IL-2, INF-γ, IL-4 és IL-10) termelése Th1, Th2 és Treg limfocitákból áramlási citometriával. A végén elvégzik a statisztikai elemzést.

A résztvevőket arra is felkérik, hogy töltsenek ki egy űrlapot, amely rögzíti a tüneteket és a lehetséges nemkívánatos eseményeket.

Limfociták szétválasztása A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) sűrűséggradiens centrifugálással (Ficoll-Hypaque; Sigma-Aldrich) izoláltuk frissen vett vénás vérből. Az intracelluláris citokintermelést PBMC-ben (1x106 sejt/cső) 37°C-on 4 órán át stimuláltuk Streptomyces konglobátumokból származó Ionomicyn kalciumsóval (1 μg/1x106 sejt, Sigma-Aldrich), Brefeldin A-val (10 μg/1 x106 kémiai cég) és forbol-12-mirisztát-13-acetát (PMA-25ng/1 x 106 sejt, Sigma-Aldrich).

A T-sejtek sejtfelszíne és intracelluláris festése A PBMC-ket (PBS) foszfáttal pufferolt sóoldattal (pH 7,2) (Thermo Fisher Scientific) újraszuszpendáltuk, és monoklonális konjugált antitestekkel festettük meg fluoreszcein-izotiocináttal (FITC), illetve komplex Perilldináttal (FITC) fikoeritrin (PE) vagy allophycocyanin (APC), és CD69-re (L/78), CD25-re, CD3-ra, CD4-re (BD PharmigenTM és BD Bioscience) irányítva 20 percig. Az IL-4 (BD PharmigenTM), IL-2, INF-γ (BD Fast Immune), FoxP3 (Affymetrix) és IL10 (eBioscinence) intracelluláris festéséhez a sejteket előzőleg fixáló pufferrel (BioLegend) fixáltuk 20 percig a szobában. hőmérsékletet, majd egy mosási lépést permeabilizáló pufferrel (Perm/Wash Buffer BD Pharmigen TM) a gyártó protokollja szerint, majd a festő sejteket monoklonális antitesttel inkubáltuk 20 percig szobahőmérsékleten, és újraszuszpendáltuk PBS pufferben. A Th1, Th2 és Treg szubpopulációk áramlási citometriával történő értékelését az IL-2+ és INF-γ+ százalékos expressziója alapján határoztuk meg a Th1 limfocitákra, az IL-4+ a Th2 és a CD25+FoxP3+IL-10+ expressziójára a Treg esetében a CD3-on belül. +CD4+ kapu. Az adatok gyűjtése és elemzése négyparaméteres FACS Calibur áramlási citométerrel történt, ProCellQuest szoftver (Beckman Coulter; BD Biosciences) és Flowing Software (2.5.1-es verzió) használatával. Cell Imaging Core .