Immunmodulierende Wirkungen einer Supplementierung mit 25-OH Vitamin D (SCLERODERMA)

Die Studie wird mit vorheriger Genehmigung der lokalen Forschungs- und Ethikkommission durchgeführt. Patienten, die Anspruch auf unsere Gesundheitsdienste haben und die Screening-Kriterien erfüllen, werden eingeschlossen.

Patienten mit Sklerodermie, die in unserer Datenbank enthalten sind, werden per Telefonanruf zur Teilnahme an der Studie eingeladen. Patienten, die die Screening-Kriterien erfüllen und sich bereit erklären, an der Studie teilzunehmen, erhalten einen Termin.

Am Tag des Interviews erhalten sie die Einwilligungserklärung. Sobald es unterzeichnet wurde, werden sie gebeten, den klinischen Rekorder auszufüllen, und es wurden Serumproben für biochemische Bestimmungen, einschließlich des Vitamin-D-Status, entnommen.

Sobald die Patienten die ersten Untersuchungen abgeschlossen haben, wird zwei Wochen später ein weiterer Besuch geplant. Patienten mit Hypovitaminose-D-Ergebnis werden nach dem Zufallsprinzip einer von zwei Gruppen zugeordnet: Gruppe 1. Vitamin-D3-Ergänzung und Gruppe 2. Ernährungsempfehlungen. Zwei Gruppen erhielten Anweisungen, Ernährungsempfehlungen zu befolgen oder eine Vitamin-D3-Ergänzung zu erhalten und die medizinischen Messungen abzuschließen. Zusätzlich schlossen die Forscher SSc-Patienten mit Vitamin-D-Suffizienz und einen weiteren mit gesunden Spendern ein.

Beim zweiten Besuch (vier Wochen später) werden klinische Daten und folgende Parameter erhoben: Calcium, Phosphor, Parathormon durch Quimioluniscencia 25-Hydroxyvitamin D Serumstatus durch ELISA, intrazelluläres Zytokin (IL-2, INF-γ, IL- 4 und IL-10)-Produktion aus Th1-, Th2- und Treg-Lymphozyten durch Durchflusszytometrie.

Gruppe 1. Tägliche orale Dosierungen von 5.000 UI Vitamin D3 während 4 Wochen.

Gruppe 2. Ernährungsempfehlungen gemäß den Empfehlungen für die normale tägliche Aufnahme von Vitamin D in der Nahrung während 4 Wochen.

Darüber hinaus schließen die Forscher die SSc-Gruppe mit Vitamin-D-Suffizienz und gesunde Spender als Vergleichspersonen ein.

Jede Gruppe erhält schriftliche Anweisungen zum Drogenkonsum. Am Ende der Ergänzungen wird ein weiterer Besuch geplant, um die Einhaltung der Behandlung zu überprüfen (verbleibende Kapseln werden gezählt) und die Patienten werden die zweite klinische Bewertung und den Kalzium-, Phosphor- und Parathormon-Status durch quimioluniscencia 25-Hydroxyvitamin-D-Serumstatus durch ELISA, intrazellulär, durchführen Cytokin (IL-2, INF-γ, IL-4 und IL-10)-Produktion von Th1-, Th2- und Treg-Lymphozyten durch Durchflusszytometrie. Am Ende erfolgt die statistische Auswertung.

Die Teilnehmer werden auch gebeten, ein Formular auszufüllen, in dem Symptome und mögliche unerwünschte Ereignisse aufgezeichnet werden.

Lymphozytentrennung Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) wurden durch Dichtegradientenzentrifugation (Ficoll-Hypaque; Sigma-Aldrich) aus frisch entnommenem venösem Blut isoliert. Die intrazelluläre Zytokinproduktion in PBMCs (1 x 106 Zellen/Röhrchen) wurde bei 37 °C für 4 Stunden mit Ionomicyn-Calciumsalz aus Streptomyces conglobates (1 μg/ 1 x 10 6 Zellen, Sigma-Aldrich), Brefeldin A (10 μg/ 1 x 10 6 Zellen, Cayman Chemical Company) und stimuliert Phorbol-12-myristat-13-acetat (PMA-25 ng/1 × 10 6 Zellen, Sigma-Aldrich).

Zelloberflächen- und intrazelluläre Färbung von T-Zellen PBMCs wurden mit (PBS) phosphatgepufferter Kochsalzlösung (pH 7,2) (Thermo Fisher Scientific) resuspendiert und mit monoklonalen konjugierten Antikörpern entweder mit Fluoresceinisothiocyanat (FITC), Peridinin-Chlorophyll-Proteinkomplex (PerCP), Phyco-Erythrin (PE) oder Allophycocyanin (APC) und für 20 min auf CD69 (L/78), CD25, CD3, CD4 (BD PharmigenTM und BD Bioscience) gerichtet. Für die intrazelluläre Färbung von IL-4 (BD PharmigenTM), IL-2, INF-γ (BD Fast Immune), FoxP3 (Affymetrix) und IL10 (eBioscinence) wurden die Zellen zuvor mit Fixierungspuffer (BioLegend) für 20 min bei Raumtemperatur fixiert Temperatur gefolgt von einem Waschschritt mit Permeabilisierungspuffer (Perm/Wash Buffer BD Pharmigen TM) gemäß den Protokollen des Herstellers, dann wurden Färbezellen mit monoklonalem Antikörper für 20 min bei Raumtemperatur inkubiert und in PBS-Puffer resuspendiert. Die Bewertung von Th1-, Th2- und Treg-Subpopulationen durch Durchflusszytometrie wurde als prozentuale Expression von IL-2+ und INF-γ+ für Th1-Lymphozyten, IL-4+ für Th2 und CD25+FoxP3+IL-10+ für Treg innerhalb des CD3 bestimmt +CD4+ Tor. Die Daten wurden mit einem Vierparameter-Durchflusszytometer FACS Calibur unter Verwendung der ProCellQuest-Software (Beckman Coulter; BD Biosciences) und Flowing Software (Version 2.5.1) erfasst und analysiert. Cell-Imaging-Kern .