25-OH 비타민 D 보충의 면역 조절 효과 (SCLERODERMA)

연구는 지역 연구 및 윤리 위원회의 사전 승인을 받아 수행됩니다. 의료 서비스를 받을 자격이 있고 선별 기준을 준수하는 환자가 포함됩니다.

데이터베이스에 포함된 경피증 환자는 전화를 통해 연구에 참여하도록 초대됩니다. 선별 기준을 준수하고 연구 참여를 수락하는 환자에게는 날짜가 주어집니다.

면접 당일에 사전 동의서를 받게 됩니다. 서명이 완료되면 임상 기록을 완료하라는 요청을 받고 비타민 D 상태를 포함한 생화학적 결정을 위해 혈청 샘플을 수집했습니다.

환자가 초기 평가를 완료하면 2주 후에 또 다른 방문 일정이 잡힙니다. 비타민 D 결핍증 결과가 있는 환자는 그룹 1. 비타민 D3 보충 및 그룹 2. 식이 권장의 두 그룹 중 하나로 무작위로 배정됩니다. 두 그룹은 식이 권장 사항을 따르거나 비타민 D3 보충을 받고 의료 측정을 완료하라는 지시를 받았습니다. 또한 조사관은 비타민 D가 충분한 SSc 환자와 건강한 기증자가 있는 다른 환자를 포함했습니다.

두 번째 방문(4주 후)에서 임상 데이터와 다음 매개변수가 기록됩니다: 칼슘, 인, 퀴미올루니센시아에 의한 부갑상선 호르몬 ELISA에 의한 25-하이드록시비타민 D 혈청 상태, 세포내 사이토카인(IL-2, INF-γ, IL- 4 및 IL-10) 유세포분석에 의한 Th1, Th2 및 Treg 림프구로부터의 생산.

그룹 1. 4주 동안 5,000 UI 비타민 D3의 일일 경구 투여량.

그룹 2. 4주 동안 식품의 정상적인 일일 비타민 D 섭취 권장량에 따른 식이 권장량.

또한 연구자들은 비타민 D가 충분한 SSc 그룹과 건강한 기증자를 모두 비교 대상으로 포함하고 있습니다.

각 그룹에는 약물 사용에 관한 서면 지침이 제공됩니다. 보충 종료 시 또 다른 방문이 치료 순응도를 확인하기 위해 예정되어 있으며(남은 캡슐이 계산됨) 환자는 두 번째 임상 평가를 완료하고 quimioluniscencia에 의한 칼슘, 인, 부갑상선 호르몬 ELISA에 의한 25-하이드록시비타민 D 혈청 상태, 세포내 유동 세포측정법에 의한 Th1, Th2 및 Treg 림프구로부터의 사이토카인(IL-2, INF-γ, IL-4 및 IL-10) 생산. 마지막에 통계 분석이 수행됩니다.

참가자는 또한 증상 및 잠재적 부작용을 기록하는 양식을 작성해야 합니다.

림프구 분리 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 밀도 구배 원심분리(Ficoll-Hypaque; Sigma-Aldrich)에 의해 새로 뽑아낸 정맥혈로부터 분리했습니다. PBMC(1x106개 세포/튜브)에서 세포내 사이토카인 생산은 Streptomyces conglobates(1μg/ 1 x106 세포, Sigma-Aldrich), Brefeldin A(10μg/ 1 x106 세포, Cayman chemical company)의 Ionomicyn 칼슘 염으로 37ºC에서 4시간 동안 자극되었습니다. 포르볼-12-미리스테이트-13-아세테이트(PMA-25ng/1 x106 세포, Sigma-Aldrich).

T 세포의 세포 표면 및 세포내 염색 PBMC를 (PBS) 인산염 완충 식염수(pH 7.2)(Thermo Fisher Scientific)로 재현탁하고 FITC(fluorescein isothiocynate), Peridinin 엽록소 단백질 복합체(PerCP), phyco-erythrin(PE) 또는 allophycocyanin(APC) 및 20분 동안 CD69(L/78), CD25, CD3, CD4(BD PharmigenTM 및 BD Bioscience)로 향함. IL-4(BD PharmigenTM), IL-2, INF-γ(BD Fast Immune), FoxP3(Affymetrix) 및 IL10(eBioscinence)의 세포내 염색을 위해 이전에 세포를 고정 버퍼(BioLegend)를 사용하여 실온에서 20분 동안 고정했습니다. 온도에 이어 제조업체의 프로토콜에 따라 투과성 완충액(Perm/Wash Buffer BD Pharmigen TM)으로 세척한 다음, 염색 세포를 실온에서 20분 동안 단클론 항체와 함께 배양하고 PBS 완충액에 재현탁했습니다. 유세포 분석법에 의한 Th1, Th2 및 Treg 하위 집단의 평가는 Th1 림프구에 대한 IL-2+ 및 INF-γ+ 백분율 발현, Th2에 대한 IL-4+ 및 CD3 내의 Treg에 대한 CD25+FoxP3+IL-10+로 결정되었습니다. +CD4+ 게이트. 데이터는 ProCellQuest 소프트웨어(Beckman Coulter; BD Biosciences) 및 Flowing Software(버전 2.5.1)를 사용하는 4개 매개변수 유세포 분석기 FACS Calibur를 사용하여 수집 및 분석되었습니다. 셀 이미징 코어 .