Trapianto di cellule epatiche per fenilchetonuria

Agli epatociti di più di un donatore può essere richiesto di fornire un numero sufficiente di cellule per il trapianto per correggere il processo patologico. Abbiamo precedentemente stimato che la massa epatica di un ricevente si avvicina a 4 x 10 alla nona potenza epatociti/kg. Tuttavia, questa è solo una stima e la massa reale potrebbe essere il doppio di questo numero. Il nostro obiettivo è tentare di infondere almeno 2x10 fino all'ottava cella di potenza/kg. Una volta stabilito che i criteri di rilascio IND per gli epatociti sono stati soddisfatti, il paziente riceverà quindi la terapia con radiazioni a modulazione di intensità (IMRT) e inizierà il trapianto di epatociti.

Irradiazione epatica preparativa: una porzione del lobo epatico destro comprendente tra il 35 e il 50% dell'intero volume epatico verrà irradiata a una dose di 10 Gy in una singola frazione utilizzando un sistema di radiochirurgia stereotassica basato su acceleratore lineare con radioterapia a intensità modulata pianificazione (IMRT). Il gating respiratorio verrà utilizzato per aumentare ulteriormente l'accuratezza dell'erogazione della dose a un volume specificato e limitare l'esposizione ai tessuti adiacenti. Dopo l'irradiazione epatica, la vena porta destra o principale sarà occlusa transitoriamente (0-90 min) per fornire un segnale mitotico compensatorio agli epatociti donatori. È stato dimostrato che l'occlusione o l'embolizzazione transitoria della vena porta nei primati fornisce i segnali mitotici appropriati necessari per la proliferazione delle cellule del donatore. A quel punto, gli epatociti del donatore saranno trapiantati nella porzione irradiata del fegato del ricevente.

Il numero di infusioni da ciascun donatore di fegato dipenderà dalla tolleranza del paziente all'infusione (evitando la trombosi della vena porta e lo shunt dalla vena porta al sistema venoso sistemico) e dalla vitalità degli epatociti del donatore. Gli epatociti di ciascun donatore di fegato verranno somministrati in tre o quattro infusioni, ogni 6-8 ore, fino a quando le cellule non saranno più vitali, circa ventiquattro ore dopo la preparazione iniziale. Idealmente, il catetere per infusione verrà mantenuto appena fuori dalla circolazione portale nella vena ombelicale residua in modo che il paziente possa essere potenzialmente dimesso dall'ospedale fino a quando non sarà disponibile il prossimo donatore di fegato. Poiché non conosciamo ancora dalla nostra esperienza il numero di cellule necessarie per il trapianto al fine di migliorare la funzione in modo da curare una malattia metabolica, continueremo a infondere epatociti man mano che i donatori saranno disponibili fino al raggiungimento del volume obiettivo di epatociti e fino alla vitalità di celle è scaduto. L'utilizzo di epatociti da più donatori contribuirà a garantire che venga infuso un numero adeguato di cellule mantenendo la pressione portale nell'intervallo normale. I livelli di Phe verranno raccolti una volta alla settimana dal soggetto, utilizzando un campione di sangue capillare su una carta da filtro per screening neonatale, e spedito a CHP. I livelli di Phe saranno raccolti mensilmente in un campione venoso. Durante i mesi in cui è programmata una visita di follow-up, verrà raccolto sia un campione venoso che capillare.

I soggetti riceveranno un'attenta osservazione dietetica post-trapianto attraverso l'UPMC Children's Hospital di Pittsburgh Division of Medical Genetics dietista di ricerca. I registri della dieta di tre giorni saranno completati una volta al mese per sei mesi, quindi ogni tre mesi in seguito. La dieta dovrebbe rimanere invariata durante lo studio, a meno che non sia indicato dal personale dello studio.

I soggetti saranno sottoposti a una valutazione neuropsicologica ripetuta a 6, 12 e 24 mesi dopo il trapianto (visite 4 e 6 e visita di fine studio) che verrà confrontata con i risultati ottenuti prima del trapianto per determinare se un miglioramento del punteggio di valutazione è associato a la procedura del trapianto.

Il monitoraggio isotopico dell'ossidazione del Phe in tutto il corpo verrà eseguito ad ogni visita di follow-up dopo l'infusione finale di epatociti. Un ulteriore test di ossidazione Phe può anche essere completato in caso di sospetto rigetto dell'innesto.

Le biopsie epatiche verranno eseguite a 3 e 12 mesi dopo il trapianto per valutare la presenza di epatociti del donatore e possono essere completate in caso di sospetto rigetto del trapianto.