Selezione degli embrioni mediante monitoraggio Time Lapse per il trasferimento di un singolo embrione ("SET")

RCT prospettico che confronta due metodi di selezione degli embrioni (algoritmo TL vs basato sulla morfologia standard) per SET. Sono state arruolate coppie infertili programmate per sottoporsi a fecondazione in vitro o iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) e che soddisfacevano i criteri di inclusione-esclusione. La randomizzazione ai gruppi 1 o 2 è stata eseguita prima dell'inizio della stimolazione. La randomizzazione è stata effettuata in blocchi di due, selezionando TL o assegnazioni di controllo da buste chiuse e opache. I pazienti erano accecati dall'allocazione. Per la stimolazione sono stati utilizzati i protocolli standard luteale lungo (Suprefact, Sanofi Aventis) e flessibile dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH) (Cetrotide, Merck Serono) e FSH ricombinante (Gonal-f, Merck Serono). Gli embrioni sono stati collocati in singoli pozzetti di un piatto di coltura Primo Vision a 9 pozzetti (Vitrolife AB, Svezia) il giorno 1 della coltura, dopo aver verificato la fecondazione. La manipolazione fuori dall'incubatrice è stata la stessa nei gruppi: giorno 1: controllo della fecondazione; giorno 3: cambio del mezzo di coltura; giorno 5: trasferimento. Nei giorni 3 e 5, gli embrioni sono stati valutati morfologicamente al microscopio invertito. Gli embrioni nel gruppo TL sono stati ripresi a intervalli di 10 minuti. Il software Primo Vision è stato utilizzato per l'analisi delle immagini TL. La prima apparizione degli stadi cellulari 2, 3, 4 e 5 (t2, t3, t4 e t5, rispettivamente) è stata annotata. La tempistica degli eventi cinetici è stata calcolata dal momento della fecondazione (t0). (per le definizioni dei parametri TL vedi supplemento) Non ci sono stati aggiustamenti degli eventi cinetici a seconda del metodo di fecondazione. La morfologia della blastocisti è stata valutata utilizzando il punteggio di Gardner. La frammentazione è stata valutata quando ha raggiunto il grado più alto nella sequenza delle immagini TL. Sono state registrate anche anomalie citoplasmatiche (vacuoli). Gli intervalli di riferimento TL sono stati definiti e fissati prima dell'inizio del reclutamento, gli embrioni nel gruppo di controllo sono stati selezionati in base alla morfologia effettiva. L'endpoint primario era il tasso di gravidanza (PR; aumento della β gonadotropina corionica umana [hCG]) per paziente in base all'intenzione di trattare. Ulteriori endpoint erano il tasso di gravidanza in corso (OPR; gravidanza che progredisce oltre le 12 settimane di gestazione), la perdita di gravidanza (interruzione della gravidanza dopo un aumento iniziale di βhCG fino alla 12a settimana di gestazione), il tasso di nati vivi (LBR), l'età gestazionale (GA) a parto e peso alla nascita della prole.

Nel calcolare la dimensione del campione abbiamo ipotizzato un aumento del 13% del tasso di gravidanza da un previsto 42% al 55%. Abbiamo pianificato di eseguire lo studio con un rapporto 1:1 tra i gruppi e di eseguire un monitoraggio intermedio con una frazione di informazioni di 0,1. Utilizzando il test a due code e i confini di Pocock per la stima, sono stati calcolati 282 pazienti in ciascun gruppo (potenza dell'80%, p del 5%). Ipotizzando un tasso di abbandono del 10%, avevamo bisogno di arruolare 620 pazienti.

Sulla base dei risultati del monitoraggio ad interim (61 casi in due bracci) il tasso di gravidanza nel gruppo TL era superiore del 15% rispetto ai controlli (58,3% vs. 44,0%). Assumendo un tasso di gravidanza del 58% nel gruppo TL e del 44% nei controlli, era necessaria una dimensione del campione di 210 per gruppo per raggiungere una potenza dell'80%, con un livello di significatività del 5%. Assumendo un tasso di abbandono del 10%, era necessario un campione totale di 462 pazienti.

I gruppi sono stati confrontati sulla base dei principi di stima della massima verosimiglianza. Abbiamo ipotizzato e poi dimostrato che i pazienti nei bracci di trattamento erano simili al basale, in media, rispetto alle variabili che potrebbero influenzare l'esito. Per l'analisi delle variabili categoriche sono stati utilizzati test del chi-quadrato, test del rapporto di verosimiglianza e test esatti. Le variabili continue sono state confrontate utilizzando il test t di gruppo indipendente e. analisi della varianza. Sono state esaminate la normalità e l'omogeneità delle varianze.

All'analisi ad interim dello studio, l'endpoint primario (tasso di gravidanza) tra TL e gruppo di controllo è stato confrontato con il test esatto di Fisher. Dopo aver chiuso lo studio, l'endpoint primario (tasso di gravidanza) tra i gruppi è stato confrontato con il test esatto di Fisher. La correzione di Bonferroni è stata utilizzata per il valore p alla fine della prova. Tutti gli altri valori p sono stati considerati di natura esplorativa. Nel corso delle analisi sono state esaminate anche l'entità e la distribuzione dei dati mancanti. Non sono state effettuate imputazioni per dati mancanti.