I parametri time-lapse possono essere utilizzati per prevedere la gravidanza di embrioni umani?

L'obiettivo è studiare se l'algoritmo calcolato dalla fotografia time-lapse di embrioni umani di per sé può migliorare la previsione del potenziale riproduttivo dell'embrione rispetto alla sola morfologia dell'embrione.

METODI E MATERIALE Procedura di fecondazione in vitro Gli ovociti recuperati 36±1h dopo la somministrazione di hCG saranno fecondati mediante inseminazione standard o ICSI. La mattina dopo il prelievo degli ovociti (giorno 1) gli zigoti verranno inseriti in vetrini time-lapse embrionali per la coltura fino al giorno del trasferimento (giorno 5). Durante il periodo di coltura, gli embrioni saranno conservati in terreni di coltura disponibili in commercio e non verranno rimossi dall'incubatore time-lapse fino al giorno del trasferimento. Gli embrioni interagiscono con i media e potranno sviluppare lo stadio di blastocisti (coltura di 5-6 giorni) momento in cui verrà effettuata la selezione per il trasferimento. Durante la coltura in vitro, una singola immagine acquisita nell'incubatore time-lapse verrà utilizzata per classificare morfologicamente gli embrioni di routine, secondo il consenso di Istanbul. Il giorno 5, gli embrioni in via di sviluppo saranno valutati (secondo i criteri del gruppo di studio rispetto al gruppo di controllo) per selezionare l'embrione da trasferire nel paziente. I supernumerosi GQE saranno criopreservati per usi futuri.

Fotografia time-lapse Tutti gli embrioni saranno collocati in pozzetti di piatti di coltura time-lapse (Embryoscope) secondo le istruzioni del produttore. Gli embrioni di entrambi i gruppi saranno coltivati ​​allo stadio di blastocisti senza alcun cambiamento di media. Il sistema time-lapse è composto da un incubatore da tavolo che controlla il suo ambiente (pH, CO2 e O2) e scatta foto fino a 11 piani focali per l'intera durata dei periodi di coltura.

Punteggio morfologico La morfologia embrionale sarà valutata secondo il punteggio di Gardner e poi tradotta nel sistema di consenso di Istanbul se necessario per la pubblicazione.

Per garantire che tutti gli embriologi annotino correttamente lo sviluppo dell'embrione e valutino le blastocisti allo stesso modo, verrà eseguito un processo di convalida prima dell'inizio dello studio. La standardizzazione sarà realizzata attraverso un processo in cui gli embriologi segneranno 20 blastocisti allo stadio di sviluppo del giorno 5, che saranno forniti su un CD, imitando la procedura che verrà eseguita di routine in laboratorio. Gli embriologi dovranno essere approvati per poter valutare gli embrioni nello studio.

Valutazione dell'embrione (entrambi i gruppi). Gli embrioni saranno coltivati ​​nel sistema time-lapse Embryoscope fino al giorno 5. Se si sviluppano due o più blastocisti di buona qualità (GQB), cioè che soddisfano un criterio morfologico minimo di 3BB o migliore, viene presa una decisione preliminare su quale embrione selezionare per il trasferimento. Successivamente la coppia viene randomizzata nel gruppo di controllo o nel gruppo time-lapse.

Processo decisionale nel gruppo time-lapse Se la coppia viene randomizzata nel gruppo time-lapse, verranno annotati tutti gli embrioni che hanno raggiunto lo stadio di blastocisti. La blastocisti con il punteggio KID più alto (giorno 5) verrà scelta per il trasferimento. Per garantire un punteggio KID affidabile possono essere raggiunti gli eventi morfologici; devono essere valutati il ​​tempo a 2, 3, 4 e 5 cellule, il tempo all'inizio della blastulazione (tSB) e i punteggi TE.

Processo decisionale nel gruppo di controllo Se la coppia viene randomizzata nel gruppo di controllo, verrà mantenuta la decisione preliminare sulla selezione degli embrioni.

Monitoraggio dello studio. Verrà assegnato un gruppo del Data Study Monitoring Board (DSMB) che avrà il compito di condurre sia i controlli di sicurezza che un'analisi ad interim (pianificata quando sarà stato reclutato circa il 50% dei pazienti).