Cellula staminale mesenchimale allogenica per difetto osseo o frattura non sindacale (AMSC)

Metodi di ricerca Disegno dello studio Questo studio è solo uno studio sperimentale post test. Tempo di studio stimato Il tempo stimato dalla ricerca sarebbe di 24 mesi, da maggio 2014 a maggio 2016. Procedura di acquisizione del campione Questa ricerca è uno studio pilota. I campioni vengono ottenuti consecutivamente da tutta la popolazione di origine che soddisfa i criteri. Il numero di campioni da ciascuna fonte di cellule staminali mesenchimali (adiposo, midollo osseo e cordone ombelicale) è tre. Ciascun campione derivava da tre diversi donatori che soddisfacevano i criteri di inclusione. Per l'impianto i soggetti sono cinque per ogni intervento. Tuttavia, per quanto riguarda la fonte di finanziamento e il tempo limitati, recluteremo un soggetto per ogni tipo di MSC.

Soggetto Criteri Criteri di inclusione per il donatore di MSC

Donatore di midollo osseo:

Maschio/femmina di età compresa tra 19 e 30 anni senza comorbidità (diabete mellito, malattie cardiovascolari e qualsiasi altra malattia autoimmune), test dell'HIV, test dell'epatite B e test dell'epatite C sono negativi, nessuna contaminazione fungina e batterica nel midollo osseo. I soggetti sono disposti ad essere aspirati nella cresta iliaca per ottenere il midollo osseo.

Donatore di grasso:

Il tessuto adiposo viene ottenuto dalla liposuzione o dalla procedura di fissazione interna a riduzione aperta. I campioni di adiposo sono esenti da HIV, Epatite B, Epatite C e da contaminazioni fungine e batteriche.

Donatore di cordone ombelicale:

Il cordone ombelicale è forma elettiva seccio caecaria da una madre a termine senza alcuna complicazione e libero da HIV, epatite B, epatite C e nessuna contaminazione fungina e batterica.

Criteri di inclusione del destinatario Pazienti con difetti ossei critici di età compresa tra 6 e 55 anni che sono disposti a sottoporsi a intervento chirurgico.

Criteri di esclusione del ricevente Pazienti con frattura patologica causata da tumore maligno, immunocompromessi (HIV AIDS, Diabete mellito, Epatite attiva), in terapia immunosoppressiva (chemioterapia o steroidi).

Criteri di abbandono I pazienti sono esclusi da questo studio se ha dichiarato di farlo nel tempo in cui si svolge questa ricerca o se subisce qualsiasi altra minaccia che non sia correlata a questo studio. Il paziente che non mostra alcun miglioramento clinico in tre mesi consecutivi è classificato come non minacciato. Tutti abbandonano e non riescono a minacciare il paziente che potrebbe ricevere altre minacce.

Consenso informato Tutti i soggetti devono compilare e firmare le lettere di consenso informato.

Protocollo di ricerca Metodo di prelievo di cellule staminali mesenchimali Prelievo di midollo osseo Il paziente è disteso in posizione supina, anestetizzato localmente. L'asettico e l'antisettico vengono eseguiti nella posizione della cresta illiaca. L'ago di aspirazione è inserito a 450° dall'orizzonte nella cresta illiaca. L'hub viene rilasciato e una siringa da 10 cc contenente eparina viene collegata all'ago. Abbiamo aspirato circa 50 cc di midollo osseo da ciascun soggetto.

Prelievo del cordone ombelicale Subito dopo il parto, il cordone ombelicale viene tagliato e conservato in una ciotola sterile contenente NaCl 0,9% in 40 fino a quando non si procede al prelievo.

Presa adiposa Il tessuto adiposo deriva dalla liposuzione o dalla procedura di fissazione interna a riduzione aperta. Viene conservato in una ciotola sterile contenente NaCL 0,9% a 40 C. L'elaborazione del campione viene eseguita entro 8 ore dal prelievo del campione.

Crioconservazione e riattivazione. Tutti i campioni vengono portati al laboratorio di coltura nel servizio integrato di tecnologia medica delle cellule staminali Cipto mangunkusumo hospita.this laboratorio è certificato GMP (buon prodotto di fabbricazione). I campioni sono stati coltivati ​​in terreno appropriato fino a raggiungere la confluenza e raccolti. Le cellule vengono quindi sottoposte al test di caratterizzazione mediante citometro a flusso e la vitalità e i numeri vengono contati. Alcune cellule vengono poi crioconservate mentre altre vengono impiantate direttamente nel paziente. Le cellule vengono crioconservate per tre mesi e poi riattivate. Fattibilità e numeri quindi vengono misurati. Le cellule vengono quindi impiantate al paziente non sindacale.

Sterilità dei campioni I test di sterilità vengono eseguiti tre volte per garantire l'assenza di contaminazione da funghi e batteri.

HA-CaSO4 e MSC Per ogni centimetro di difetto sono necessari 10 milioni di cellule e 50 pellet di HA-CaSO4. Le MSC diluite vengono quindi miscelate con HA-CaSO4 e incubate 5 minuti prima dell'impianto.

Intervento L'intervento chirurgico è necessario per assemblare il dispositivo di fissaggio nell'osso lungo. Durante l'intervento chirurgico, pellet HA-CaSO4 vengono inseriti nel difetto. Dopo che i tessuti molli sono stati chiusi, il resto del siero viene iniettato nell'area del difetto.

Osservazione e follow up Il follow up clinico e radiologico viene effettuato ogni 4 settimane. L'osservazione viene eseguita per 12 mesi o fino a quando l'osso si unisce. Ogni soggetto sarà seguito in terza, sesta, dodicesima e ventiquattresima o fino a quando il dispositivo di fissazione non sarà rimosso.

Criteri del ricevente per frattura da mancato consolidamento