Аллогенные мезенхимальные стволовые клетки при костном дефекте или несросшемся переломе (AMSC)

Методы исследования. Дизайн исследования. Это исследование является экспериментальным послетестовым исследованием только одной группы. Предполагаемое время исследования Расчетное время исследования составит 24 месяца, с мая 2014 года по май 2016 года. Процедура отбора проб Это исследование является экспериментальным. Образцы берутся последовательно из всей исходной популяции, удовлетворяющей критериям. Количество образцов из каждого источника мезенхимальных стволовых клеток (жировой ткани, костного мозга и пуповины) равно трем. Каждый образец был получен от трех разных доноров, которые соответствовали критериям включения. Для имплантации субъектов пять от каждого вмешательства. Тем не менее, что касается ограниченного источника финансирования и времени, мы будем набирать по одному субъекту для каждого вида MSC.

Тема Критерии Критерии включения для донора МСК

Донор костного мозга:

Мужчина/женщина в возрасте 19-30 лет без сопутствующих заболеваний (сахарный диабет, сердечно-сосудистые и любые другие аутоиммунные заболевания), тест на ВИЧ, тест на гепатит В и гепатит С отрицательный, грибковой и бактериальной обсемененности костного мозга нет. Субъекты готовы к аспирации гребня подвздошной кости, чтобы получить костный мозг.

Донор жира:

Жировая ткань получается в результате липосакции или открытой процедуры внутренней фиксации. Образцы жира свободны от ВИЧ, гепатита В, гепатита С и свободны от грибкового и бактериального загрязнения.

Донор пуповины:

Пуповина сформирована факультативно seccio caecaria от доношенной матери без каких-либо осложнений и без ВИЧ, гепатита В, гепатита С и без грибковой и бактериальной контаминации.

Критерии включения реципиентов Пациенты с критическими дефектами кости в возрасте от 6 до 55 лет, желающие подвергнуться хирургическому вмешательству.

Критерии исключения реципиента Пациенты с патологическим переломом, вызванным злокачественным новообразованием, с ослабленным иммунитетом (ВИЧ-СПИД, сахарный диабет, активный гепатит), получающие иммуносупрессивную терапию (химиотерапия или стероиды).

Критерии исключения Пациенты исключаются из этого исследования, если они заявили об этом во время проведения этого исследования или если они подвергаются любой другой угрозе, не связанной с этим исследованием. Пациент, у которого не наблюдается никакого клинического улучшения в течение трех месяцев подряд, классифицируется как не угрожающий. Все выбывают и не угрожают, что пациент может получить другую угрозу.

Информированное согласие Все субъекты должны заполнить и подписать письма об информированном согласии.

Протокол исследования Метод взятия мезенхимальных стволовых клеток Взятие костного мозга Пациент лежит на спине, под местной анестезией. В области подвздошного гребня проводят асептическую и антисептическую обработку. Аспирационная игла вводится на 45° до горизонта в подвздошный гребень. Концентратор отпускается, и к игле подсоединяется шприц объемом 10 мл, содержащий гепарин. Мы аспирировали около 50 мл костного мозга у каждого субъекта.

Забор пуповины Сразу после родов пуповину перерезают и хранят в стерильной посуде, содержащей 0,9% NaCl в 40 г, до тех пор, пока не будет взят образец.

Забор жировой ткани Жировая ткань образуется в результате липосакции или открытой процедуры внутренней фиксации. Его хранят в стерильной посуде, содержащей 0,9% NaCL, при 40°С. Обработку образца проводят в течение 8 часов после взятия образца.

Криоконсервация и реактивация. Все образцы доставляются в культуральную лабораторию интегрированной службы медицинских технологий стволовых клеток Cipto mangunkusumo hospita.this лаборатория имеет сертификат GMP (надлежащий производственный продукт). Образцы культивировали в подходящей среде до слияния и собирали. Затем клетки подвергают характеризационному тесту с помощью проточного цитометра и подсчитывают их жизнеспособность и количество. Часть клеток затем подвергают криоконсервации, а часть непосредственно имплантируют пациенту. Клетки криоконсервируют в течение трех месяцев, а затем реактивируют. Затем измеряют жизнеспособность и численность. Затем клетки имплантируют несращенному пациенту.

Стерильность образцов Тесты на стерильность проводятся три раза, чтобы убедиться в отсутствии грибкового и бактериального загрязнения.

HA-CaSO4 и MSC На каждый сантиметр дефекта необходимо 10 миллионов клеток и 50 гранул HA-CaSO4. Затем разбавленные МСК смешивают с HA-CaSO4 и инкубируют в течение 5 минут перед имплантацией.

Вмешательство Хирургическое вмешательство необходимо для установки фиксирующего устройства в длинную кость. Во время операции в дефект вводят гранулы HA-CaSO4. После закрытия мягких тканей остаток сыворотки вводят в область дефекта.

Наблюдение и последующее наблюдение Клиническое и рентгенологическое наблюдение проводится каждые 4 недели. Наблюдение проводится в течение 12 месяцев или до тех пор, пока кость не срастется. Каждый субъект будет наблюдаться на третьем, шестом, двенадцатом и двадцать четвертом или до тех пор, пока не будет снято фиксирующее устройство.

Критерии реципиента несращенного перелома