Allogeniczna mezenchymalna komórka macierzysta dla wady kości lub złamania bez zrostu (AMSC)

Metody badawcze Projekt badania To badanie jest eksperymentalnym badaniem jednoramiennym wyłącznie po teście końcowym. Szacowany czas badania Szacowany czas badania to 24 miesiące, od maja 2014 do maja 2016. Procedura pobierania próbek To badanie jest badaniem pilotażowym. Próbki są pobierane kolejno ze wszystkich populacji źródłowych, które spełniają kryteria. Liczba próbek z każdego źródła mezenchymalnych komórek macierzystych (tłuszczu, szpiku kostnego i pępowiny) wynosi trzy. Każda próbka pochodziła od trzech różnych dawców, którzy spełniali kryteria włączenia. Dla implanacji badanych jest pięciu z każdej interwencji. Jednak ze względu na ograniczone źródło finansowania i czas, będziemy rekrutować po jednym przedmiocie dla każdego rodzaju MSC.

Przedmiot Kryteria Kryteria włączenia dla dawcy MSC

Dawca szpiku kostnego:

Mężczyzna/kobieta w wieku 19-30 lat bez chorób współistniejących (cukrzyca, układ sercowo-naczyniowy i inne choroby autoimmunologiczne), test na obecność wirusa HIV Test na zapalenie wątroby typu B i test na zapalenie wątroby typu C są ujemne, brak zakażenia grzybiczego i bakteryjnego w szpiku kostnym. Pacjenci są chętni do aspiracji z grzebienia biodrowego w celu pobrania szpiku kostnego.

Dawca tkanki tłuszczowej:

Tkankę tłuszczową uzyskuje się w wyniku liposukcji lub zabiegu zespolenia wewnętrznego metodą otwartej redukcji. Próbki tkanki tłuszczowej są wolne od wirusów HIV, wirusowego zapalenia wątroby typu B, wirusowego zapalenia wątroby typu C oraz wolne od zanieczyszczeń grzybiczych i bakteryjnych.

Dawca pępowiny:

Pępowina pochodzi z planowego seccio caecaria od matki donoszonej bez żadnych komplikacji i jest wolna od HIV, wirusowego zapalenia wątroby typu B, wirusowego zapalenia wątroby typu C oraz bez skażenia grzybiczego i bakteryjnego.

Kryteria włączenia biorców Pacjenci z krytycznymi ubytkami kostnymi w wieku 6-55 lat, którzy chcą poddać się interwencji chirurgicznej.

Kryteria wykluczenia biorcy Pacjenci ze złamaniami patologicznymi spowodowanymi chorobą nowotworową, z obniżoną odpornością (HIV AIDS, cukrzyca, czynne zapalenie wątroby), w trakcie leczenia immunosupresyjnego (chemioterapia lub sterydy).

Kryteria rezygnacji Pacjenci są wykluczeni z tego badania, jeśli wyrazili na to zgodę w czasie przeprowadzania tego badania lub są narażeni na inne zagrożenia, które nie są związane z tym badaniem. Pacjent, który nie wykazuje poprawy klinicznej w ciągu trzech kolejnych miesięcy, jest klasyfikowany jako nie zagrażający. Wszyscy rezygnują i nie grożą pacjentowi, może dostać inne zagrożenie.

Świadoma zgoda Wszyscy uczestnicy muszą wypełnić i podpisać listy świadomej zgody.

Protokół badania Metoda pobierania mezenchymalnych komórek macierzystych Pobieranie szpiku kostnego Pacjent leży w pozycji leżącej, znieczulony miejscowo. Aseptyczne i antyseptyczne wykonuje się w miejscu grzebienia biodrowego. Igła aspiracyjna jest wprowadzona pod kątem 450 do horyzontu w grzebieniu biodrowym. Piasta zostaje zwolniona, a do igły zostaje podłączona strzykawka o pojemności 10 cm3 zawierająca heparynę. Od każdego pacjenta pobraliśmy około 50 cm3 szpiku kostnego.

Pobieranie pępowiny Zaraz po porodzie pępowina jest odcinana i przechowywana w sterylnej misce zawierającej 0,9% NaCl w 40% do czasu pobrania próbki.

Pobieranie tkanki tłuszczowej Tkankę tłuszczową uzyskuje się w wyniku liposukcji lub procedury wewnętrznej stabilizacji metodą otwartej redukcji. Przechowywany jest w sterylnym naczyniu zawierającym 0,9% NaCL w temperaturze 40 C. Obróbka próbki odbywa się w ciągu 8 godzin od jej pobrania.

Kriokonserwacja i reaktywacja. Wszystkie próbki są pobierane do laboratorium hodowli w ramach zintegrowanej usługi technologii medycznej komórek macierzystych Cipto mangunkusumo hospita.this Laboratorium posiada certyfikat GMP (Good Manufacturing Product). Próbki hodowano w odpowiedniej pożywce, aż do osiągnięcia konfluencji i zbierano. Komórki następnie poddaje się testowi charakteryzacji za pomocą cytometru przepływowego i liczy się ich żywotność i liczbę. Niektóre komórki są następnie kriokonserwowane, a niektóre są bezpośrednio wszczepiane pacjentowi. Komórki są kriokonserwowane przez trzy miesiące, a następnie reaktywowane. Żywotność i liczby są następnie mierzone. Komórki są następnie wszczepiane pacjentowi bez zrostu.

Sterylność próbki Testy sterylności wykonuje się trzykrotnie, aby upewnić się, że nie doszło do zanieczyszczenia grzybami i bakteriami.

HA-CaSO4 i MSC Na każdy centymetr defektu potrzeba 10 milionów komórek i 50 peletek HA-CaSO4. Następnie rozcieńczony MSC miesza się z HA-CaSO4 i inkubuje 5 minut przed wszczepieniem.

Interwencja Aby zamontować urządzenie mocujące w kości długiej, konieczna jest interwencja chirurgiczna. Podczas zabiegu wprowadza się do ubytku peletkę HA-CaSO4. Po zamknięciu tkanek miękkich pozostała część surowicy jest wstrzykiwana w obszar ubytku.

Obserwacja i obserwacja Kontrolę kliniczną i radiologiczną przeprowadza się co 4 tygodnie. Obserwację prowadzi się przez 12 miesięcy lub do momentu zrośnięcia się kości. Każdy pacjent będzie obserwowany w trzecim, szóstym, dwunastym i dwudziestym czwartym lub do momentu zdjęcia urządzenia mocującego.

Kryteria biorcy dla złamania bez zrostu