Células madre mesenquimales alogénicas para defectos óseos o fracturas sin unión (AMSC)

Métodos de investigación Diseño del estudio Este estudio es un estudio experimental posterior a un brazo solamente. Tiempo estimado de estudio El tiempo estimado de investigación sería de 24 meses, de mayo de 2014 a mayo de 2016. Procedimiento de obtención de muestras Esta investigación es un estudio piloto. Las muestras se obtienen consecutivamente de toda la población fuente que cumple con los criterios. El número de muestras de cada fuente de células madre mesenquimales (adiposo, médula ósea y cordón umbilical) es de tres. Cada muestra procedía de tres donantes diferentes que cumplían los criterios de inclusión. Para la implantación, los sujetos son cinco de cada intervención. Sin embargo, con respecto a la fuente de financiación y el tiempo limitados, reclutaremos un sujeto para cada tipo de MSC.

Tema Criterios Criterios de inclusión para donante de MSC

Donante de médula ósea:

Hombre/mujer de 19 a 30 años sin comorbilidades (diabetes mellitus, cardiovascular y cualquier otra enfermedad autoinmune), prueba de VIH, prueba de hepatitis B y prueba de hepatitis C son negativas, sin contaminación fúngica y bacteriana en la médula ósea. Los sujetos están dispuestos a ser aspirados en la cresta ilíaca para obtener la médula ósea.

Donante adiposo :

El tejido adiposo se obtiene de la liposucción o del procedimiento de fijación interna de reducción abierta. Las muestras de tejido adiposo están libres de VIH, Hepatitis B, Hepatitis C y libres de contaminación fúngica y bacteriana.

Donante de cordón umbilical:

Cordón umbilical son forma electiva seccio caecaria de una madre a término sin ninguna complicación y libre de VIH, hepatitis B, hepatitis C y sin contaminación fúngica y bacteriana.

Criterios de inclusión del receptor Pacientes con defectos óseos críticos de 6 a 55 años que deseen someterse a una intervención quirúrgica.

Criterios de exclusión del receptor Pacientes con fractura patológica por malignidad, inmunocomprometidos (VIH SIDA, Diabetes mellitus, Hepatitis activa), en tratamiento inmunosupresor (quimioterapia o esteroides).

Criterios de abandono Se descarta de este estudio a los pacientes que así lo hayan manifestado en el tiempo de realización de esta investigación o estén sometidos a cualquier otra amenaza que no esté relacionada con este estudio. El paciente que no muestra ninguna mejoría clínica en tres meses consecutivos se categoriza como una amenaza fallida. Todos abandonaron y no amenazaron al paciente que podría recibir otra amenaza.

Consentimiento informado Todos los sujetos deben completar y firmar las cartas de consentimiento informado.

Protocolo de investigación Método de toma de células madre mesenquimales Toma de médula ósea El paciente está acostado en posición supina, anestesiado localmente. Se realizan asépticos y antisépticos en la ubicación de la cresta ilíaca. La aguja de aspiración se inserta 450 hasta el horizonte en la cresta ilíaca. Se suelta el concentrador y se conecta a la aguja una jeringa de 10 cc que contiene heparina. Aspiramos alrededor de 50 cc de médula ósea de cada sujeto.

Toma del cordón umbilical Inmediatamente después del nacimiento del bebé, se corta el cordón umbilical y se mantiene en un recipiente estéril que contiene 0,9% de NaCl en 40 hasta que se procede a la toma de muestra.

Obtención de tejido adiposo El tejido adiposo se deriva de la liposucción o del procedimiento de fijación interna de reducción abierta. Se mantiene en un recipiente estéril que contiene NaCl al 0,9 % a 40 °C. El procesamiento de la muestra se realiza dentro de las 8 horas posteriores a la toma de la muestra.

Criopreservación y reactivación. Todas las muestras son llevadas al laboratorio de cultivo en servicio integrado de tecnología médica de células madre Cipto mangunkusumo hospita.this laboratorio está certificado GMP (buen producto de fabricación). Las muestras se cultivaron en medio apropiado hasta confluencia y se recolectaron. A continuación, las células se someten a una prueba de caracterización mediante un citómetro de flujo y se cuenta la viabilidad y el número. Luego, algunas de las células se crioconservan, mientras que otras se implantan directamente en el paciente. Las células se crioconservan durante tres meses y luego se reactivan. Luego se miden la viabilidad y los números. Luego, las células se implantan en pacientes sin unión.

Esterilidad de las muestras Las pruebas de esterilidad se realizan tres veces para garantizar que no haya contaminación fúngica o bacteriana.

HA-CaSO4 y MSC Por cada centímetro de defecto, se necesitan 10 millones de células y 50 gránulos de HA-CaSO4. Luego, las MSC diluidas se mezclan con HA-CaSO4 y se incuban 5 minutos antes de implantarlas.

Intervención Se necesita una intervención quirúrgica para montar el dispositivo de fijación en el hueso largo. Durante la cirugía, se insertan gránulos de HA-CaSO4 en el defecto. Después de cerrar los tejidos blandos, el resto del suero se inyecta en el área del defecto.

Observación y seguimiento El seguimiento clínico y radiológico se realiza cada 4 semanas. La observación se realiza durante 12 meses o hasta que el hueso se une. Todo sujeto será seguido en el tercero, sexto, duodécimo y vigésimo cuarto o hasta que se retire el dispositivo de fijación.

Criterios de receptor para fractura sin unión