Alogenní mezenchymální kmenová buňka pro kostní defekt nebo zlomeninu bez spojení (AMSC)

Metody výzkumu Návrh studie Tato studie je pouze experimentální jednoramenná studie po testu. Odhadovaná doba studia Odhadovaná doba výzkumu bude 24 měsíců, od května 2014 do května 2016. Postup získávání vzorku Tento výzkum je pilotní studií. Vzorky se získávají postupně od všech zdrojových populací, které splňují kritéria. Počet vzorků z každého zdroje mezenchymálních kmenových buněk (tukové, kostní dřeně a pupeční šňůry) jsou tři. Každý vzorek pocházel od tří různých dárců, kteří splnili kritéria pro zařazení. Pro implanaci je subjektů pět z každé intervence. Vzhledem k omezenému zdroji financování a času však nabereme jeden subjekt pro každý druh MSC.

Předmětová kritéria Kritéria zařazení pro dárce MSC

Dárce kostní dřeně:

Muž/žena ve věku 19-30 let bez jakýchkoliv komorbiditit (Diabetes mellitus, kardiovaskulární a jakékoli jiné autoimunitní onemocnění), HIV test Test na hepatitidu B a hepatitidu C jsou negativní, bez plísňové a bakteriální kontaminace v kostní dřeni. Subjekty jsou ochotny aspirovat v hřebenu kyčelního kloubu, aby získaly kostní dřeň.

Tukový dárce:

Tuková tkáň se získává liposukcí nebo otevřenou redukcí vnitřní fixací. Vzorky tukové tkáně jsou bez HIV, hepatitidy B, hepatitidy C a bez plísňové a bakteriální kontaminace.

Dárce pupeční šňůry:

Pupečník tvoří elektivní seccio caecaria od donošené matky bez jakýchkoli komplikací a bez HIV, hepatitidy B, hepatitidy C a bez plísňové a bakteriální kontaminace.

Kritéria pro zařazení příjemce Pacienti s kritickým kostním defektem ve věku 6-55 let, kteří jsou ochotni podstoupit chirurgický zákrok.

Kritéria pro vyloučení příjemce Pacienti s patologickou zlomeninou způsobenou maligním onemocněním, imunokompromitovaní (HIV AIDS, Diabetes mellitus, aktivní hepatitida), v imunosupresivní léčbě (chemoterapie nebo steroidy).

Kritéria pro opuštění studie Pacienti jsou z této studie vyřazeni, pokud uvedli, že tak učiní v době konání tohoto výzkumu, nebo pokud podstoupí jakékoli jiné ohrožení, které s touto studií nesouvisí. Pacient, který nevykazuje žádné klinické zlepšení ve třech po sobě jdoucích měsících, je zařazen do kategorie neúspěšné ohrožení. Všichni vypadli a neohrozili pacienta, mohli dostat jiné ohrožení.

Informovaný souhlas Všechny subjekty musí vyplnit a podepsat informovaný souhlas.

Výzkumný protokol Metoda odběru mezenchymálních kmenových buněk Odběr kostní dřeně Pacient leží v poloze na zádech a je lokálně znecitlivěn. Aseptické a antiseptické se provádějí v místě hřebene ilické kosti. Aspirační jehla je zavedena 450 k horizontu v hřebenu ilické kosti. Náboj se uvolní a k jehle se připojí injekční stříkačka o objemu 10 cm3, která obsahuje heparin. Od každého subjektu jsme aspirovali asi 50 ccm kostní dřeně.

Odběr pupeční šňůry Hned po porodu dítěte se pupeční šňůra přestřihne a uchovává ve sterilní misce obsahující 0,9% NaCl v 40 až do provedení odběru.

Odběr tukové tkáně Tuková tkáň pochází z liposukce nebo otevřené redukce vnitřní fixace. Uchovává se ve sterilní misce obsahující NaCL 0,9% při 40 C. Zpracování vzorku se provádí do 8 hodin po odběru vzorku.

Kryokonzervace a reaktivace. Všechny vzorky jsou odebírány do kultivační laboratoře v integrované službě lékařské technologie kmenových buněk Cipto mangunkusumo hospita.this laboratoř má certifikát GMP (good production Product). Vzorky byly kultivovány ve vhodném médiu, dokud nedosáhly konfluence a byly sklizeny. Buňky pak podstoupí karakterizační test průtokovým cytometrem a spočítá se životaschopnost a počty. Některé buňky jsou poté kryokonzervovány, zatímco některé jsou přímo implantovány pacientovi. Buňky jsou kryokonzervovány po dobu tří měsíců a poté reaktivovány. Poté se měří životaschopnost a počty. Buňky jsou poté implantovány do nezletilého pacienta.

Sterilita vzorků Testy sterility se provádějí třikrát, aby se zajistilo, že nedochází k plísňové a bakteriální kontaminaci.

HA-CaSO4 a MSC Na každý centimetr defektu je potřeba 10 milionů buněk a 50 pelet HA-CaSO4. Zředěný MSC se poté smíchá s HA-CaSO4 a inkubuje se 5 minut před implantací.

Intervence K sestavení fixačního zařízení v dlouhé kosti je nutný chirurgický zákrok. Při operaci se do defektu vloží peleta HA-CaSO4. Po uzavření měkkých tkání se zbytek séra vstříkne do oblasti defektu.

Pozorování a sledování Klinické a radiologické sledování se provádí každé 4 týdny. Pozorování se provádí po dobu 12 měsíců nebo dokud se kost nesjednotí. Každý subjekt bude sledován ve třetím, šestém, dvanáctém a dvacátém čtvrtém nebo do sejmutí fixačního zařízení.

Kritéria příjemce pro nejednotnou zlomeninu