Corsi di tempo cinetico di bisfenolo-S nei volontari

Come primo passo, i volontari saranno esposti per via orale acuta a 0,1 mg/kg di peso corporeo (pc) per via orale (corrispondenti a 7 mg per un individuo di 70 kg). Secondo la recente valutazione della US Environmental Protection Agency (U.S. EPA), questa dose è considerata non associata a nessun effetto avverso per uno scenario di esposizione subcronica nei ratti (EPA, 2014). Verrà utilizzata la forma deuterata del bisfenolo S (BPS d8, Toronto Research Chemical) per evitare potenziali interferenze con il BPS nella dieta. La dose che verrà somministrata ai volontari (0,1 mg/kg pc) per via orale, in forma deuterata, è identica a quella precedentemente utilizzata in uno studio su volontari esposti al Bisfenolo A (0,1 mg/kg di BPA-d6 somministrato per via orale nei volontari) (Thayer et al., 2015).

La dose di riferimento di BPS (RfD) è stata stabilita sulla base di uno studio di tossicità parentale di 45 giorni in ratti maschi esposti per via orale con un livello senza effetti avversi osservati (NOAEL) di 10 mg/kg di peso corporeo (livello di effetto avverso più basso osservato (LOAEL) ) di 60 mg/kg pc/giorno per la tossicità parentale, e un valore NOAEL e LOAEL di 60 e 300 mg/kg pc/giorno per la tossicità riproduttiva) (EPA 2014) (pagina 4-282). La dose somministrata ai volontari sarà 100 volte inferiore al NOAEL e considererà un fattore di incertezza interspecie di 10 e interindividuale di 10. I sei volontari saranno quindi esposti per via orale acuta alla dose precedentemente determinata (0,1 mg/kg pc).

Per la somministrazione il prodotto verrà sciolto in etanolo (100 mg/ml pari a 10 mg/100 μl) e la soluzione verrà depositata su un biscotto (deposito di circa 70 μl di soluzione su un biscotto per un individuo di 70 kg ) e si lascia evaporare l'etanolo prima della somministrazione a ciascun volontario, con successivo consumo di 100 ml di acqua.

In una seconda componente, i volontari saranno esposti dermicamente acuti alla dose di 1 mg/kg di peso corporeo. È importante notare che attualmente non esiste una dose di riferimento raccomandata per l'esposizione cutanea. Studi sulla tossicocinetica del bisfenolo A (BPA) nel modello animale e umano hanno stimato che la frazione di assorbimento era dell'8,6 ± 2,1% negli espianti di pelle umana (n = 7) (Demierre et al., 2012). La dose prevista per la somministrazione cutanea presuppone che l'assorbimento cutaneo sia <10% sulla base dello studio Demierre e pertanto potrebbe essere superiore alla dose orale. L'esperienza preliminare su un volontario sarà fatta prima di fare tutti i volontari previsti.

Circa 48 ore prima dell'esposizione cutanea alla BPS, si consiglia di rimuovere i peli dell'avambraccio facendo attenzione a non irritare eccessivamente la pelle. La soluzione verrà quindi applicata su un'area di 40 cm2 dell'avambraccio e delimitata dal pennarello indelebile. Il BPS verrà aggiunto in sospensione in una soluzione acquosa contenente l'1% di carbossimetilcellulosa e somministrato sotto forma di gocce (70 µl per un individuo di 70 kg). L'area trattata verrà lasciata non rivestita e non lavata per un periodo di 4 ore. Dopo 4 ore, l'area di applicazione verrà lavata con acqua e sapone. Questo tipo di applicazione è quindi simile a un'esposizione della popolazione generale attraverso la pelle (manipolazione di incassi).

La cinetica del bisfenolo S (BPS) e del suo metabolita (BPS glucurono-coniugato (BPSG) nel sangue sarà documentata prelevando il sangue mediante puntura venosa al tempo: -30 min (campione di controllo) e ad orari fissi durante un periodo di 48 ore post-trattamento: a 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 1 h 15, 1 h 30, 1 h 45, 2 h, 3 h, 4 h, 5 h, 6 h, 8 h, 10 h, 24 ore e 48 ore dopo il trattamento (n = 17 campioni per individuo). Un catetere verrà inserito durante il giorno dell'esposizione, per consentire il prelievo di sangue in serie. Verranno raccolti un totale di 20 ml per punto temporale, che rappresentano un totale di 340 ml, che è inferiore a una donazione di sangue.

Per documentare i tempi urinari, i vuoti di urina completi saranno raccolti in flaconi distinti a periodi di tempo prestabiliti: -10 h-0 h (controllo) e 0-2 h, 2-4 h, 4-6 h, 6-8 h, 8 -10 h, 10-12 h, 12-14 h, 14-24 h, 24-48 h e 48-72 h dopo la somministrazione (n = 11 raccolte per individuo e tutti gli annullamenti tra due punti temporali saranno raggruppati).