Valutazione della terapia fotodinamica antimicrobica in molteplici applicazioni come coadiuvante nella terapia chirurgica dell'accesso allo scaling

Terapia parodontale non chirurgica

Sette giorni prima della terapia parodontale non chirurgica, verranno prelevate radiografie periapicali da tutta la bocca di tutti i pazienti. Saranno impostati in un programma di igiene orale (OHP) in base alle loro esigenze specifiche. In questo programma, i pazienti verranno istruiti su un efficace controllo della placca auto-eseguito, comprese le informazioni sulla tecnica di Bass (Bass, 1954) e la pulizia interprossimale con filo interdentale e spazzolini interdentali. Saranno inoltre motivati ​​a spazzolare la superficie dorsale della lingua una volta al giorno e riceveranno un dentifricio che verrà utilizzato per tutto il periodo sperimentale (Colgate Total®, Anakol Ind. Com Ltda - Brazil's Kolynos - Colgate Palmolive Co., Sao Bernardo do Campo, SP, Brasile). Dopo l'OHP, i soggetti saranno sottoposti alla valutazione dei parametri clinici parodontali precedentemente descritti e verrà eseguita la raccolta della placca sottogengivale e del GCF in siti selezionati (baseline). A breve i pazienti riceveranno detartrasi sopragengivale e lucidatura coronale con coppetta profilattica su tutti i denti presenti nel cavo orale. La terapia parodontale non chirurgica inizierà 7 giorni dopo l'OHP e l'iniziale scaling sopragengivale. Entro 24 ore, uno specialista in parodontologia eseguirà il ridimensionamento sopra e sottogengivale e la levigatura radicolare di tutti i denti con coinvolgimento parodontale, utilizzando strumenti manuali (Gracey Curettes, Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) e ad ultrasuoni. La strumentazione verrà eseguita su ciascun quadrante fino al raggiungimento di un'adeguata pulizia e levigatura radicolare, che verrà verificata con un esploratore dentale. Gli individui riceveranno la profilassi professionale bisettimanale per tre mesi dopo la fine della terapia parodontale non chirurgica. Nelle visite di controllo bisettimanali verrà monitorata la collaborazione del paziente verificando lo stato di igiene orale.

Terapia parodontale chirurgica

Le operazioni del lembo vengono eseguite 8 settimane dopo l'inizio della preparazione di base. I pazienti saranno monitorati clinicamente e i siti che presentano presenza di PS ≥ 5 mm e SS saranno sottoposti a terapia chirurgica di raschiamento al dettaglio. Le procedure chirurgiche saranno eseguite da uno specialista in Parodontologia. Inizialmente i pazienti saranno sottoposti ad antisepsi extraorale con clorexidina 2% ed intraorale tramite collutorio con clorexidina 0,12%. La regione da operare infiltrativa riceve anestesia locale con soluzione di lidocaina al 2% e adrenalina 1:100.000. Successivamente verrà eseguita un'incisione intrasulculare con una lama di bisturi a 15C coprendo il sito con PS ≥ 5 mm e i denti adiacenti. Verrà eseguito un lembo mucoperiosteo fino alla rimozione dell'esposizione della cresta ossea e dei depositi sottogengivali di calcolo e/o tessuto di granulazione mediante curette Gracey convenzionali con RAR e Mini Five, numeri 5/6, 7/8 e 11/12 13/ 14 (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) e dispositivi ad ultrasuoni. Poco dopo il completamento del RAR inizia a tfdA la regione operata nella terapia adiuvante selezionata per questo gruppo. Terminata la terapia, il lembo verrà posizionato nella stessa sede di origine e stabilizzato con semplici punti di sutura tramite filo Vicryl 5-0. Per evitare sintomi dolorosi verranno prescritti analgesici (Paracetamolo 750 mg, 01 compressa ogni 6 ore per 48 ore). Verranno inoltre prescritti sciacqui orali delicati con clorexidina digluconato allo 0,12%, 2 volte al giorno per 14 giorni. Le suture vengono rimosse dopo 7 giorni. Viene eseguito il controllo della placca sopragengivale settimanale nel primo mese e mensilmente fino al completamento di 3 mesi dopo l'intervento chirurgico.

Terapia fotodinamica antimicrobica

Dopo l'accesso chirurgico e la realizzazione del lembo RARÎ, i siti chirurgici selezionati per ricevere il TfdA saranno irrigati con soluzione salina, asciugati con garza sterile, un periodo di 10 minuti e attesi, fino a quando non ci sarà più sanguinamento. Subito dopo, verrà applicato il fotossintentizador cloridrato fenotiazina, il cui componente principale è il blu di toluidina ad una concentrazione di 10mg/mL (Helbo Blue, Helbo Photodynamic Sytems, Grieskirchen, Austria), che sarà a contatto per 3 minuti. Successivamente, verrà eseguita l'irrigazione con soluzione salina per la rimozione del fotosensibilizzante in eccesso e le aree colorate verranno irradiate con un diodo laser di lunghezza d'onda 660 nm, potenza massima 60 mW/cm2 e densità di energia di 0,6J/cm2 (Helbo therapielaser, Helbo Photodynamic Systems GmbH & Co KG, Grieskirchen, Austria), per 60 secondi per sito. Il trattamento viene eseguito in 6 siti sui denti, per un totale di sei minuti di applicazione di luce laser per dente. I denti con lesione della biforcazione aumenteranno più di 60 secondi nella lesione.

Ogni paziente verrà impressionato con alginato per ottenere modelli delle arcate dentarie ed elaborare una placca guida in acetato. Questa placca presenterà scanalature che serviranno da riferimento per standardizzare l'inserimento e l'inclinazione della sonda parodontale automatizzata (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). L'indice di placca visibile per ciascun paziente, valutato in modo dicotomico (O'Leary et al. 1972), sarà determinato dalla percentuale di superfici dentali con depositi di placca colorati con soluzione rivelante.

Protocollo post-chirurgico

Il trattamento con TFDa nel Gruppo Test ha mantenuto il protocollo di applicazione nei periodi di 2, 7 e 14 giorni post intervento chirurgico come descritto da (Ramos et al., 2016). Questo protocollo è distinto dal precedente dal tempo di esposizione alla luce laser. Nel protocollo sopra descritto, il tempo di esposizione è di 60 secondi per sito per un totale di 6 minuti. In questo, le applicazioni sono di soli 10 secondi per sito in 6 siti per dente, per un totale di 1 minuto di esposizione. I denti che coinvolgono la lesione della biforcazione hanno avuto altri 10 secondi all'interno della lesione.

Monitoraggio clinico

I seguenti parametri clinici parodontali saranno valutati in 6 siti di ciascun dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, mesio-linguale, linguale e disto-linguale): (i) profondità di sondaggio della tasca (PPD): sarà misurata dal margine gengivale al fondo della tasca; (ii) recessione gengivale (GR): sarà misurata dalla giunzione smalto-cemento al fondo della tasca; (iii) livello di attacco clinico (CAL): sarà misurato come PPD + GR (GR sarà uguale a 0 ogni volta che la giunzione cemento-smalto è coperta); (iv) sanguinamento al sondaggio (BOP): sarà valutato in modo dicotomico: la presenza del sanguinamento sarà considerata positiva quando si verifica entro 30 secondi dall'inserimento della sonda per la profondità di sondaggio; (v) Indice di placca (PI): sarà valutato in modo dicotomico. BOP, PPD, CAL e GR saranno misurati in sei siti per dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, disto-linguale, linguale e mesio-linguale). Tutte le misurazioni di sondaggio verranno eseguite utilizzando una sonda parodontale automatizzata.

I parametri clinici parodontali e l'indice di placca di ciascun paziente saranno registrati al basale (pre-intervento), nonché +30 e +90 giorni dopo la terapia parodontale chirurgica. L'indice Kappa sarà utilizzato per valutare la calibrazione dell'esaminatore sulla raccolta dei parametri parodontali clinici al fine di calcolare l'accordo intra-esaminatore. Secondo i criteri di diagnosi dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'indice di concordanza Kappa accettabile deve essere maggiore o uguale a 0,85 (WHO, 1997). Questo livello di accordo verrà utilizzato per la calibrazione dell'esaminatore in questo progetto. Per calibrare l'esaminatore verranno selezionati dieci pazienti, ognuno dei quali presenterà almeno due paia di denti controlaterali a radice singola con PD ≥ 5 mm in siti interprossimali. Ogni paziente sarà valutato in due occasioni separate a distanza di 48 ore al fine di ottenere l'attendibilità intra-esaminatore attraverso l'indice Kappa.

Monitoraggio microbiologico

Al basale e +30 e +90 giorni dopo la terapia parodontale chirurgica, verranno prelevati campioni di placca sottogengivale da otto siti interprossimali di ciascun paziente. I campioni saranno analizzati individualmente per il loro contenuto di 40 specie batteriche subgengivali utilizzando la tecnica di ibridazione DNA-DNA a scacchiera (Socransky et al., 2004a; Socransky et al., 2004b). I denti selezionati verranno isolati con rulli di cotone sterili ed asciugati con getti d'aria. Quindi, la placca sopragengivale verrà accuratamente rimossa utilizzando una curette sterile. Un'altra curette sterile verrà utilizzata per raccogliere la placca sottogengivale, partendo dal fondo della tasca parodontale fino alla sua porzione coronale. I campioni saranno conservati in provette Eppendorf sterilizzate e processati presso il Laboratorio di Microbiologia dell'Università di Guarulhos (UNG, Guarulhos, SP, Brasile).

analisi statistica

Verrà verificata la normalità e l'omoschedasticità dei dati ottenuti. I confronti all'interno dei gruppi e tra i gruppi a diversi intervalli di tempo saranno effettuati mediante opportuni test parametrici o non parametrici. Il livello di significatività sarà fissato al 5% in tutti i test. Tutti i calcoli saranno eseguiti dal software SPSS (SPSS, Chicago IL, USA).