Effetto di Omega 3 come immunomodulatore in aggiunta allo sbrigliamento parodontale

Definizione del campione: Pazienti di età superiore ai 18 anni ricoverati presso l'Unità Diagnostica della Facoltà di Odontoiatria (DUFD), campus di Viña del Mar dell'Università Nazionale Andres Bello (UNAB) nel corso del 2016, con diagnosi di parodontite cronica moderata o grave, soddisfano entrambi i criteri di inclusione ed esclusione e accettano volontariamente di partecipare al presente lavoro di ricerca, firmando un consenso informato. I partecipanti scelti sono stati informati della natura della ricerca, dei potenziali rischi e del compenso per la partecipazione allo studio, ottenendo il consenso informato da ogni paziente. Calcolo della dimensione del campione: per calcolare la dimensione minima del campione necessaria per la costituzione dei gruppi di controllo e di intervento, la varianza della differenza di profondità di sondaggio è stata considerata come valori fissi, basati sui risultati sopra descritti. Considerando quanto sopra e utilizzando un livello di significatività del 5%, una potenza statistica dell'80% e un errore di stima di 1 mm, sono stati ottenuti almeno 7 pazienti per ciascun gruppo, per un totale di 14 soggetti minimi da studiare. Protocollo ed esame clinico: su un totale di 31 pazienti selezionati, 20 di quelli che soddisfacevano i criteri di inclusione sono stati assegnati in modo casuale dal coordinatore dello studio a uno dei due gruppi utilizzando una sequenza di generazione casuale utilizzando un software. Due soggetti hanno rifiutato di partecipare alla ricerca. In questo modo, sono stati formati due gruppi da indagare: un gruppo di intervento (8 soggetti) che ha ricevuto SRP più 2 g di un Omega una volta al giorno per 90 giorni immediatamente dopo l'SRP, e un gruppo di controllo (10 soggetti) che ha ricevuto SRP più placebo nelle stesse condizioni del gruppo di intervento. Un soggetto del gruppo di controllo e due di intervento sono stati persi durante i sei mesi di controllo. Infine, lo hanno completato anche quindici pazienti entrati nello studio. Non sono stati rilevati problemi di compliance, tutti i pazienti hanno seguito il protocollo dello studio. Nessun soggetto ha riportato effetti avversi specifici.

Randomizzazione: solo il ricercatore principale, che ha effettuato la randomizzazione utilizzando il programma Epidat 4.0, era a conoscenza del contenuto dei contenitori e del gruppo a cui apparteneva ogni paziente nello studio, pertanto, era incaricato di etichettare i contenitori, ottenendo in in questo modo i collaboratori ei partecipanti all'indagine non ne conoscevano il contenuto se non dopo la conclusione dello studio. Standardizzazione e calibrazione: I dati sono stati raccolti utilizzando strumenti e forniture con gli stessi marchi commerciali, in un'unica sedia, sotto la stessa illuminazione e da un unico esaminatore nel caso di dati clinici e un altro esaminatore per le variabili microbiologiche. Il processo completo di PCR è stato eseguito da un biochimico appartenente al laboratorio di microbiologia, campus di Santiago dell'UNAB. È stata eseguita una calibrazione interesaminatore, in cui l'unico esaminatore clinico è stato calibrato da uno specialista in parodontologia, registrando i dati ottenuti in un foglio di calibrazione. Per questo, sono stati valutati un minimo di 10 soggetti, in cui è stato selezionato casualmente un sito di un dente appartenente a ciascun quadrante. Parodontopatogeni: la presenza di parodontopatogeni è stata considerata quando si espone il gel di agarosio dell'elettroforesi alla luce ultravioletta, è stata osservata una banda nel sito delle 197 paia di basi (bp) nella corsia che possiede il campione di bioflora sottogengivale del paziente di Pg, 316 paia di basi per Td, 745 per Tf e 167 per Fn. Raccolta dati e strumento: Prima della raccolta dati, a tutti i soggetti appartenenti allo studio è stata richiesta una radiografia panoramica a scopo diagnostico. Successivamente è stato eseguito l'esame parodontale registrando le variabili cliniche sopra descritte in una cartella clinica. Ottenimento di campioni microbiologici: l'esame microbiologico è stato eseguito prima dell'SRP su entrambi i gruppi. La raccolta di campioni microbiologici si è basata su un protocollo utilizzato presso l'Università del Cile. Utilizzando i coni di carta sterili numero 40, è stato prelevato un campione di biofilm sottogengivale dal sito con il CAL più alto, all'interno di quelli con PD ≥ 5 mm, ed è stata eseguita un'istruzione di igiene orale. Prima della raccolta del biofilm sottogengivale, l'area è stata pulita con una garza sterile per eliminare il biofilm sopragengivale. Quindi, con una pinzetta, è stato prelevato un cono di carta e la sua punta è stata posta nel solco del sito di studio per 20 secondi, per garantire l'assorbimento del fluido crevicolare e del biofilm sottogengivale. Ogni campione biologico ottenuto è stato sospeso in una provetta Eppendorf con 1 ml di acqua distillata e trasportato in frigorifero ad una temperatura di circa 4°C, entro un tempo non superiore alle 3 ore, per essere poi temporaneamente conservato a -80°C, fino al suo trasferimento e successiva estrazione dell'acido desossiribonucleico (DNA) e lavorazione con tecnica PCR. Il tempo tra il prelievo e l'estrazione del DNA non ha superato le 48 ore, per evitare il deterioramento del materiale biologico. Trattamento parodontale: Una volta completata la raccolta preliminare di tutte le variabili, è stato effettuato il trattamento parodontale non chirurgico, iniziando con la decontaminazione dell'intera bocca sopra e sottogengivale, utilizzando un piezo elettrico (DTE®, Guilin Woodpecker Medical Instrument Co., Ltd. , Guilin, Guangxi , Repubblica popolare cinese), seguita dalla pianificazione radicolare nei siti che presentano PD ≥ 5 mm e CAL ≥ 4 mm, utilizzando curette di Gracey (Hu-Friedy® Manufacturing Inc., Chicago, Illinois (IL), USA). Questa terapia è stata eseguita in tutti i pazienti, sia nel gruppo di intervento che in quello di controllo, sotto protocollo di trattamento della bocca piena, in 1 o 2 sessioni di lavoro, della durata da 1 a 2 ore, raggiungendo il trattamento entro 24 ore. Somministrazione di Omega 3 o placebo: Al termine dell'ultima sessione di trattamento, è stato somministrato l'Omega 3 (Omega 3, Galenic Pharmacy) o un placebo (Lactose, Galenic Pharmacy), a seconda del gruppo, rispettivamente dell'intervento o del controllo, a cui il paziente apparteneva. Per entrambe le terapie il regime di somministrazione è stato di 2 compresse da 1g per via orale al giorno, per 90 giorni consecutivi. Per mantenere il doppio cieco, i contenitori utilizzati per gli Omega 3 e per il placebo presentavano le stesse caratteristiche per quanto riguarda dimensione e colore. Per quanto riguarda le compresse di Omega 3 e il placebo, questi erano visivamente identici. Successivamente, al primo, terzo e sei mesi dopo la fine del trattamento non chirurgico, è stata eseguita una nuova raccolta di tutte le variabili cliniche misurate all'inizio dello studio, mentre le variabili microbiologiche sono state nuovamente misurate al terzo mese dopo il trattamento, dallo stesso sito utilizzato nel primo campionamento.