Účinek Omega 3 jako imunomodulátoru doplněk k parodontálnímu debridementu

Definice souboru: Pacienti starší 18 let přijatí na diagnostickou jednotku Fakulty zubního lékařství (DUFD), kampus Viña del Mar University National Andres Bello (UNAB) během roku 2016, s diagnózou středně těžké nebo těžké chronické parodontitidy, splňují jak kritéria pro zařazení, tak kritéria pro vyloučení a dobrovolně souhlasí s účastí na této výzkumné práci a podepíší informovaný souhlas. Vybraní účastníci byli informováni o povaze výzkumu, potenciálních rizicích a kompenzaci za účast ve studii, přičemž od každého pacienta získali informovaný souhlas. Výpočet velikosti vzorku: Pro výpočet minimální velikosti vzorku nutné pro sestavení kontrolní a intervenční skupiny byl rozptyl rozdílu hloubky sondování považován za pevné hodnoty, které vycházely z výše popsaných výsledků. S ohledem na výše uvedené a použití úrovně s významností 5 %, statistickou silou 80 % a chybou odhadu 1 mm, bylo získáno alespoň 7 pacientů pro každou skupinu, což dává celkem 14 minimálních subjektů ke studiu. Protokol a klinické vyšetření: Z celkového počtu 31 pacientů, kteří byli vybráni, bylo 20 z těch, kteří splnili kritéria pro zařazení, koordinátorem studie náhodně rozděleno do jedné ze dvou skupin pomocí náhodného generování pomocí softwaru. Dva subjekty odmítly účast ve výzkumu. Tímto způsobem byly vytvořeny dvě skupiny pro zkoumání: intervenční skupina (8 subjektů), která dostávala SRP plus 2 g Omega jednou denně po dobu 90 dnů bezprostředně po SRP, a kontrolní skupina (10 subjektů), která dostávala SRP plus placebo za stejných podmínek jako intervenční skupina. Během šestiměsíční kontroly se ztratil jeden subjekt z kontrolní skupiny a dva z intervence. Nakonec ji také dokončilo patnáct pacientů vstupujících do studie. Nebyly zaznamenány žádné problémy s compliance, všichni pacienti postupovali podle protokolu studie. Žádný subjekt neuvedl specifické nežádoucí účinky.

Randomizace: Pouze hlavní výzkumník, který provedl randomizaci pomocí programu Epidat 4.0, měl znalosti o obsahu nádob a skupině, do které každý pacient ve studii patřil, měl tedy na starosti označování nádob, dosahující v tak, že spolupracovníci a účastníci výzkumu neznali jejich obsah až po ukončení studie. Standardizace a kalibrace: Data byla shromážděna pomocí přístrojů a spotřebního materiálu stejných komerčních značek, v jedné židli, pod stejným osvětlením a jedním vyšetřujícím v případě klinických dat a dalším zkoušejícím pro mikrobiologické proměnné. Kompletní proces PCR provedl biochemik z mikrobiologické laboratoře v kampusu UNAB v Santiagu. Byla provedena kalibrace interexamineru, kdy jediný klinický examinátor byl zkalibrován specialistou na parodontologii se záznamem získaných dat do kalibračního listu. K tomu bylo hodnoceno minimálně 10 subjektů, ve kterých bylo náhodně vybráno místo jednoho zubu patřícího do každého kvadrantu. Parodontopatogeny: Přítomnost parodontopatogenů byla zvažována při vystavení agarózového gelu elektroforézy ultrafialovému světlu, pás v místě 197 párů bází (bp) byl pozorován v dráze obsahující vzorek subgingivální bioflóry pacienta Pg, 316 párů bází pro Td, 745 pro Tf a 167 pro Fn. Sběr dat a přístroj: Před sběrem dat byly všechny subjekty patřící do studie požádány o panoramatický rentgenový snímek pro diagnostické účely. Následně bylo provedeno parodontologické vyšetření registrující klinické proměnné popsané výše v klinickém záznamu. Získávání mikrobiologických vzorků: Mikrobiologické vyšetření bylo provedeno před SRP u obou skupin. Sběr mikrobiologických vzorků byl založen na protokolu, který se používá na Chilské univerzitě. Pomocí sterilních papírových kornoutů číslo 40 byl odebrán vzorek subgingiválního biofilmu z místa s nejvyšší CAL, v rámci těch s PD ≥ 5 mm, a byla provedena instruktáž ústní hygieny. Před odběrem subgingiválního biofilmu byla oblast očištěna sterilní gázou k odstranění supragingiválního biofilmu. Poté byl pinzetou odebrán papírový kužel a jeho špička byla umístěna na 20 sekund do sulku studovaného místa, aby se zajistila absorpce štěrbinové tekutiny a subgingiválního biofilmu. Každý získaný biologický vzorek byl suspendován v Eppendorfově zkumavce s 1 ml destilované vody a transportován v chladničce při teplotě přibližně 4 °C po dobu nepřesahující 3 hodiny, aby byl poté dočasně skladován při -80 °C, dokud její přenos a následná extrakce deoxyribonukleové kyseliny (DNA) a zpracování technikou PCR. Doba mezi odběrem vzorků a extrakcí DNA nepřesáhla 48 hodin, aby se zabránilo znehodnocení biologického materiálu. Parodontální ošetření: Jakmile byl dokončen předběžný sběr všech proměnných, bylo provedeno nechirurgické periodontální ošetření, počínaje supra a subgingivální celoústní dekontaminací za použití elektrického piezoelektrického piezoelektrického zdroje (DTE®, Guilin Woodpecker Medical Instrument Co., Ltd. , Guilin, Guangxi, Čínská lidová republika), následované kořenovým plánováním na místech vykazujících PD ≥ 5 mm a CAL ≥ 4 mm pomocí kyret Gracey (Hu-Friedy® Manufacturing Inc., Chicago, Illinois (IL), USA). Tato terapie byla provedena u všech pacientů, jak v intervenční, tak kontrolní skupině, podle protokolu léčby plnými ústy, v 1 nebo 2 pracovních sezeních, trvajících od 1 do 2 hodin, s dosažením léčby do 24 hodin. Podávání Omega 3 nebo placeba: Na konci posledního léčebného sezení byla podána Omega 3 (Omega 3, Galenic Pharmacy) nebo placebo (Laktóza, Galenic Pharmacy), v závislosti na skupině, intervenci nebo kontrole, do které byl pacient patřil. U obou terapií byl režim podávání 2 tablety po 1 g perorálně denně po dobu 90 po sobě jdoucích dnů. Pro zachování dvojitého zaslepení vykazovaly nádobky používané pro Omega 3 a placebo stejné vlastnosti, pokud jde o velikost a barvu. Pokud jde o tablety Omega 3 a placebo, byly vizuálně totožné. Následně, v prvním, třetím a šestém měsíci po ukončení nechirurgické léčby, byl proveden nový sběr všech klinických proměnných měřených na začátku studie, zatímco mikrobiologické proměnné byly měřeny znovu ve třetím měsíci po léčbě, ze stejného místa použitého při prvním odběru vzorků.