어린이의 제1형 당뇨병 발병에서 점막 관련 불변 T(MAIT) 세포와 장내 미생물총 및 점막 사이의 혼선 (MAIT-DT1)

주제: 다중 연구. 대상자는 Necker Sick 어린이 병원의 소아 당뇨병 및 내분비과와 ANTONY 병원의 소아과에 포함됩니다.

• 최근 발병(RO) n=40: 새로운 발병 환자는 진단 직후에 포함됩니다.
• 위험(AR) 코호트 n=70: 이전에 HLA DR3 및 DR4에 대해 양성으로 테스트된 T1D 환자의 일상적으로 선별된 형제자매가 연구의 일부가 되도록 요청받을 것입니다.
• 대조군(C) 코호트(n=50): 대조군 대상자는 내분비 검사를 위해 Necker 병원에서 상담하는 환자입니다.
• Control for Endoscopy (CE) n= 20: UGI 내시경을 위해 Necker 병원 또는 Antony 병원에서 상담하는 환자

분석:

MAIT 세포 분석: FACS 분석을 위해 MAIT 세포는 CD3+ CD4-CD161high Vα7.2+ T 세포로 식별됩니다. 표면 마커를 분석하여 활성화 상태(CD25, CD69, CD44), 고갈(PD1, KLRG1, TIM3), 이동 능력(CCR6), 증식 및 생존을 Ki67 및 BCL2 발현으로 분석합니다. 사이토카인 생성은 PMA-이오노마이신 활성화 후 IL-2, IFN-γ TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 및 그랜자임에 대한 항체로 세포질 내 염색 후 평가됩니다. B. TCR 자극(소진)에 대한 MAIT 세포의 반응 능력을 결정하기 위해, 특정 박테리아 리간드의 존재 하에 시험관 내 자극을 수행할 것이다. 활성화 마커 발현은 FACS에 의해 분석되고 세포계측법 기반 분석에 의해 상청액에서 방출된 사이토카인이 분석될 것입니다.

장내 미생물 분석: 대변 샘플을 수집하여 혐기성 조건에서 직접 보관합니다. 1시간 이내에 샘플을 처리합니다. 하나의 분획은 분취되어 -80°C에서 동결되고 다른 분획은 MAIT 리간드의 생물학적 검정을 위해 분변 상청액을 준비하는 데 사용되며 분취되고 동결됩니다. WT3 세포주 및 플레이트 결합 MR117을 사용하는 생물분석에 의해 MAIT 세포 리간드의 존재를 측정하기 위한 생물분석. 모든 시료의 16S 염기서열 분석 및 bioassay 및 16S로 얻은 결과에 따라 10개의 시료가 metagenomic 분석을 위해 선택됩니다.

Coxsackie virus B(CVB) 감염 상태: coxsackie virus B에 대한 특이항체 및 장내미생물군 검체 내 CVB specific-qPCR 측정은 3개 코호트의 모든 환자를 대상으로 실시할 예정이며, q-PCR 및 면역화학을 통한 장 점막 분석은 환자의 하위 집합에서 수행됩니다.

장 무결성: 조사관은 RO, RD 및 AR 그룹의 하위 샘플(> 5세, n=20)에서 락툴로스-만니톨 테스트를 사용하여 장의 투과성을 평가합니다. 하룻밤 금식 후 간단히 환자는 락툴로오스 5g과 만니톨 2g의 용액 50ml를 마십니다. 소변은 섭취 전과 섭취 후 5시간 동안 수집됩니다.

장 점막 분석: 일부 환자(트랜스글루타미나아제에 대한 항체의 용량으로 결정되는 체강 질병이 없는 경우)에서 십이지장 생검은 IUG 내시경 중에 시행됩니다. 십이지장 생검은 8세 이상의 RD 피험자 및 4세 이상의 CE 피험자에서 수행됩니다. 이러한 생검은 fucosyl transferase 2(fut2), 단단한 접합 단백질(occludin, claudin4), 항균 펩타이드(Reg3, LL37) 및 점액 성분(mucin 2)과 같은 주요 상피 분자의 발현에 대해 qPCR로 분석됩니다. 면역 세포 기능은 또한 IL-23, IL-17, IL-22, Foxp3, IL-10, TGFb 및 CVB와 같은 주요 사이토카인/분자에 대한 q-PCR에 의해 평가될 것입니다.

이전 연구를 기반으로 표본 크기는 AR, RO 및 C 그룹 간의 통계적 차이를 허용해야 합니다. 연구자들은 RO 환자와 일부 위험한 소아에서 혈액 MAIT 세포 이상을 관찰할 것으로 예상합니다. 이 새로운 데이터는 우리의 예측 모델을 강화할 것입니다(예비 데이터 참조). MAIT 세포는 박테리아 리간드를 인식하기 때문에 우리는 MAIT 세포 변경이 미생물 변화 및/또는 CVB 감염과 동시에 발생할 수 있다고 가정합니다. 연구자들은 RO 소아에서 장 점막 이상을 관찰할 것으로 예상하고 이러한 이상의 심각도는 MAIT 세포 결함 수준 및 CVB 감염의 존재와 관련이 있을 수 있습니다. 연구자들은 MAIT 세포가 자가면역 질환의 공격성에 대한 기능적 면역 마커뿐만 아니라 당뇨병 진행의 새로운 바이오마커임을 입증할 것으로 기대합니다. 따라서 이 연구는 MAIT 세포 조작에 기반한 예방 전략을 위한 정확한 치료 창을 결정할 수 있습니다.