Wpływ farmakogenetyki na poziom imatinibu w osoczu i odpowiedź

Wstęp:

Przewlekła białaczka szpikowa (CML) jest chorobą mieloproliferacyjną, która występuje u jednego do dwóch przypadków na 100 000 dorosłych. Stanowi około 15% nowo zdiagnozowanych przypadków białaczki u dorosłych.

Wprowadzenie imatynibu, inhibitora kinazy tyrozynowej (TKI), na początku XXI wieku uważa się za przełom w leczeniu CML. U zdecydowanej większości pacjentów leczenie imatynibem indukuje odpowiedzi cytogenetyczne, a nawet molekularne z bardzo niskimi lub niewykrywalnymi poziomami transkryptu BCR-ABL1. Pacjenci ci pozostają wolni od progresji do przełomu blastycznego. Jednak imatynib nie leczy choroby, ponieważ nie jest w stanie wyeliminować białaczkowych komórek macierzystych, co w związku z tym stanowi potencjalny rezerwuar nawrotów.

Pomimo jego skuteczności i korzystnego profilu farmakokinetycznego istnieje duża zmienność międzyosobnicza stężeń imatynibu w osoczu, co może prowadzić do niepowodzenia leczenia i progresji choroby.

Polimorfizmy w genach związanych z wchłanianiem, dystrybucją, metabolizmem i wydalaniem imatynibu mogą wpływać na biodostępność i w konsekwencji odpowiedź na lek.

Cel badania:

Badanie ma na celu zbadanie możliwego wpływu polimorfizmów genetycznych na niektóre enzymy metabolizujące [CYP3A5*3 (rs 776746), CYP2C8*3 (rs 11572080 i rs 10509681)] oraz transportery błonowe [ABCB1 2677 G>T/A (rs 2032582) i SLC22A1 1222 A > G (rs 628031)] na poziom w osoczu i odpowiedź molekularną (MMR) imatynibu u pacjentów z CML.

Te polimorfizmy wybrano na podstawie ich znaczenia dla farmakokinetyki imatynibu oraz częstości ich występowania u osób rasy kaukaskiej.

Badanie ma również na celu zapewnienie pacjentom z CML spersonalizowanej opcji leczenia, prawdopodobnie poprawiając w ten sposób odpowiedź i zmniejszając skutki uboczne.

Pacjenci i metody:

Pacjenci:

Badanie obejmie pacjentów z udokumentowanym rozpoznaniem hematologicznym, cytogenetycznym i molekularnym CML w fazie przewlekłej, którzy są w ciągłym leczeniu doustną dawką 400 mg imatynibu dziennie przez co najmniej 12 miesięcy w Klinice Onkologii Klinicznej South Egypt Cancer Institute (SECI), Assiut. Egipt.

Kryteriami wykluczającymi są: czas trwania terapii imatynibem krótszy niż 12 miesięcy, słabe przestrzeganie zaleceń lekarskich oraz identyfikacja mutacji genowych w domenie kinazowej BCR-ABL1.

Pacjenci zostaną podzieleni na 2 grupy w zależności od odpowiedzi molekularnej na imatynib w następujący sposób:

Grupa I: pacjenci z CML z MMR Grupa II: pacjenci z CML bez MMR Pacjenci z obu grup zostaną porównani pod względem stężenia imatynibu w osoczu oraz wybranych polimorfizmów genetycznych.

Metody:

Pobieranie próbek krwi:

Trzy próbki krwi (po 3 ml dla każdej) zostaną pobrane do probówek zawierających EDTA przez nakłucie żyły w celu pomiaru poziomu imatynibu w osoczu, pomiaru poziomu transkrypcji BCR-ABL1 i genotypowania.

Pomiar minimalnego poziomu imatinibu:

Próbki krwi zostaną pobrane po 24 godzinach od poprzedniej dawki (minimum) i po co najmniej 5 dniach regularnego stosowania leku, aby zapewnić osiągnięcie stanu stacjonarnego. W ciągu 1 godziny od pobrania próbki krwi będą wirowane przy 3000 obr./min przez 10 minut w temperaturze pokojowej i będą przechowywane w temperaturze -20°C do czasu analizy.

Poziom imatynibu w osoczu będzie mierzony za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcją w ultrafiolecie (HPLC-UV) zgodnie z metodą opisaną przez Barratt et al.

Pomiar poziomu transkrypcji BCR-ABL1:

Całkowity RNA zostanie wyekstrahowany z leukocytów krwi obwodowej za pomocą dostępnych zestawów do ekstrakcji RNA. Poziom transkrypcji BCR-ABL1 zostanie określony ilościowo za pomocą analizy reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym w celu oceny odpowiedzi molekularnej na imatynib po 12 miesiącach leczenia imatynibem.

Genotypowanie:

DNA zostanie wyekstrahowane z leukocytów za pomocą dostępnych zestawów do ekstrakcji DNA i będzie przechowywane w temperaturze -80°C do czasu genotypowania.

Genotypowanie zostanie przeprowadzone dla CYP3A5 * 3 (rs 776746), CYP2C8 * 3 (rs 11572080 i rs 10509681), ABCB1 2677 G>T/A (rs 2032582) i SLC22A1 1222 A > G (rs 628031) metodą PCR