Polipose associada a MUTYH (MAP)

OUTRO: Pacientes com mutações no gene MutYH

Pacientes com diagnóstico estabelecido de polipose associada a MutYH com mutações monoalélicas e bialélicas no gene MutYH

Genético: Método de sequenciamento de Sanger

A amplificação dos fragmentos examinados do gene MutYH foi realizada usando a máquina de PCR TP4-PCR-01-Tertsik (DNA-Technology, Rússia) contendo 25 μL da mistura de reação: 0,1-1,0 μg de DNA genômico; 0,25 μM de cada oligoprimer original; 200 μM de cada nucleosidetrifosfato; 1 U Taq polimerase; tampão de PCR (Tris 500 mM, KCl 500 mM, pH 8,74); 2,5 μL MgCl2 (25 mM)); água desionizada; 20-30 μL de óleo mineral. Para análise do gene MutYH (Transcript ENST00000257430) Software Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3/input.htm) foi selecionado e 16 pares de primers. As variantes da estrutura primária nos fragmentos obtidos foram reveladas usando SSCP. Fragmentos de DNA contendo variantes identificadas eletroforeticamente foram sequenciados.

Outros nomes:

• reação em cadeia da polimerase
• SSCP

OUTRO: Pacientes com múltiplos pólipos do cólon

Número de pólipos de 4+

Genético: Método de sequenciamento de Sanger

A amplificação dos fragmentos examinados do gene MutYH foi realizada usando a máquina de PCR TP4-PCR-01-Tertsik (DNA-Technology, Rússia) contendo 25 μL da mistura de reação: 0,1-1,0 μg de DNA genômico; 0,25 μM de cada oligoprimer original; 200 μM de cada nucleosidetrifosfato; 1 U Taq polimerase; tampão de PCR (Tris 500 mM, KCl 500 mM, pH 8,74); 2,5 μL MgCl2 (25 mM)); água desionizada; 20-30 μL de óleo mineral. Para análise do gene MutYH (Transcript ENST00000257430) Software Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3/input.htm) foi selecionado e 16 pares de primers. As variantes da estrutura primária nos fragmentos obtidos foram reveladas usando SSCP. Fragmentos de DNA contendo variantes identificadas eletroforeticamente foram sequenciados.

Outros nomes:

• reação em cadeia da polimerase
• SSCP

OUTRO: Amostra de controle

Pacientes que não tinham pólipos de cólon

Genético: Método de sequenciamento de Sanger

A amplificação dos fragmentos examinados do gene MutYH foi realizada usando a máquina de PCR TP4-PCR-01-Tertsik (DNA-Technology, Rússia) contendo 25 μL da mistura de reação: 0,1-1,0 μg de DNA genômico; 0,25 μM de cada oligoprimer original; 200 μM de cada nucleosidetrifosfato; 1 U Taq polimerase; tampão de PCR (Tris 500 mM, KCl 500 mM, pH 8,74); 2,5 μL MgCl2 (25 mM)); água desionizada; 20-30 μL de óleo mineral. Para análise do gene MutYH (Transcript ENST00000257430) Software Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3/input.htm) foi selecionado e 16 pares de primers. As variantes da estrutura primária nos fragmentos obtidos foram reveladas usando SSCP. Fragmentos de DNA contendo variantes identificadas eletroforeticamente foram sequenciados.

Outros nomes:

• reação em cadeia da polimerase
• SSCP

Pacientes com mutações germinativas em MutYH

número de pacientes com mutações monoalélicas e bialélicas no gene MutYH