Efeito da Suplementação de Cacau na Neuropatia Diabética Periférica e Autonômica

O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença de alta incidência no México e está associada ao desenvolvimento de complicações crônico-degenerativas, como a neuropatia diabética. Este último se manifesta como um conjunto de distúrbios que ocorrem como consequência de um estado hiperglicêmico crônico que pode induzir estresse oxidativo e inflamação, resultando em danos ao sistema nervoso autônomo e periférico. No México, foi relatado que essa complicação geralmente ocorre entre 29% e 90% dos pacientes com diabetes.

O cacau é um alimento com alto teor de flavonoides, compostos fenólicos com ação antioxidante e anti-inflamatória. Além disso, seu consumo tem sido associado à diminuição da hiperglicemia e resistência à insulina, melhora da função mitocondrial e, com base no exposto, foi sugerido um efeito nas complicações diabéticas; Isso foi demonstrado em modelos in vivo e in vitro, mas não na população humana.

Uma vez iniciados os sintomas da neuropatia diabética, são prescritos tratamentos paliativos e, até o momento, não existem compostos farmacológicos que tenham mostrado reverter as consequências da neuropatia diabética periférica e autonômica. Adicionalmente, os ensaios clínicos de compostos com propriedades antioxidantes têm feito apenas avaliações subjetivas com base em questionários sobre a percepção da melhora da neuropatia diabética e alguns marcadores bioquímicos ou testes de condução nervosa, porém, os resultados apresentados não foram conclusivos.

É por isso que se propõe um ensaio clínico randomizado controlado duplo-cego, com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de cacau em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 e neuropatia diabética periférica e autonômica sobre a) o perfil bioquímico, que inclui a avaliação de o perfil glicêmico e lipídico, quantificação de citocinas pró-inflamatórias e marcadores de estresse oxidativo; b) o perfil clínico por meio da aplicação de questionários padronizados, medidas antropométricas e pressão arterial ec) processamento somatossensorial por meio do teste do reflexo H de pulsos pareados. Hipótese: A hipótese deste estudo é que a suplementação de cacau terá um efeito benéfico no perfil bioquímico e clínico e no processamento somatossensorial da neuropatia diabética autonômica e periférica. Análise estatística: Para avaliação das variáveis ​​intragrupo, será realizada análise estatística com ANOVA para amostras repetidas com post hoc de Tukey, ou, quando for o caso, post hoc de Friedman com Dunn, assim como t de Student para grupos dependentes, ou em seu caso, com Wilcoxon. A comparação intergrupos será feita com o T de Student para amostras independentes, ou se for o caso, com o U de Mann Whitney, considerando p<0,05 como significância estatística e utilizando o software estatístico GraphPad Prism versão 5.

O teste do reflexo H será realizado por estimulação elétrica através de eletrodos de superfície descartáveis ​​conectados a um estimulador elétrico bipolar de corrente constante (Digitimer DS8R). O registro dos sinais eletrofisiológicos será realizado por meio de eletrodos de superfície conectados ao sistema de aquisição e amplificação de sinais (LabChart e PowerLab 8/35, ADInstruments). Os sinais obtidos serão amostrados a 10 quilohertz (KHz) com filtro passa-banda de 0,5-500 Hz. Os sinais serão armazenados em um computador para análise posterior.

A colocação dos eletrodos para estimulação será realizada da seguinte forma: o eletrodo ativo (anodo) ao nível do tendão de Aquiles, o eletrodo positivo (catodo) acima do “v” invertido entre os músculos da panturrilha (gastrocnêmio). Posteriormente, o eletrodo de referência será colocado ao nível das cabeças dos gastrocnêmios. Ele será estimulado atrás do joelho onde o nervo tibial tem seu trajeto anatômico.

O teste iniciará com uma intensidade de 0 miliamperes (mA) e a seguir serão dados pulsos a cada 0,5 milivolts (mV) até que o potencial evocado (reflexo H) seja observado de forma consistente e claramente identificável em função da latência (35- 45 ms). O estímulo elétrico consiste na aplicação de 1 pulso quadrado (duração de 1 ms cada pulso) a cada 10 segundos (10 pulsos no total). A intensidade máxima da corrente aplicada será de acordo com a sensibilidade e tolerância do indivíduo em ambos os membros inferiores durante os testes nos nervos sensitivo e motor. O pulso elétrico aplicado não deve causar uma sensação dolorosa, mas pode causar uma sensação de formigamento. O teste será suspenso se o indivíduo relatar dor ou não desejar continuar com o protocolo de pesquisa. O teste do reflexo "H" será feito em duas partes. A primeira parte do protocolo consiste em determinar a intensidade do estímulo vs. amplitude das respostas motoras a partir do aparecimento da onda "M" e da onda "H", para o qual a corrente elétrica será aumentada em passos de 0,5 µA até o aparecimento das ondas. Para esta parte, apenas um pulso elétrico (duração de 1 ms) será dado a cada 10 segundos. A intensidade de corrente elétrica que será utilizada para a segunda parte do protocolo será aquela cujo valor na curva de amplitude da onda H-intensidade de corrente elétrica atinja 60% da amplitude máxima. Esse valor de estimulação garante a reprodutibilidade e variabilidade mínima dessa onda, o que também evita a contração muscular que contamina o registro elétrico. A segunda parte constitui o teste de estimulação elétrica pareada em que serão produzidos dois pulsos elétricos (1 ms de duração) em diferentes frequências entre os pulsos: 0,1, 1, 5 e 10 Hz. O intervalo entre os pulsos pareados será de 10 s, até completar 10 séries.

Os registros eletrofisiológicos serão analisados ​​com o software Clampfit 10.0. A latência e a amplitude dos potenciais evocados H1 e H2 serão determinadas para cada pulso elétrico e em todas as frequências de estimulação, tomando como referência o artefato do estímulo. Posteriormente, a razão da amplitude dos pulsos H2/H1 pareados será determinada para estabelecer a modulação da excitabilidade espinhal. Uma razão ≥0,6 para qualquer frequência de estimulação será considerada como um indicador de disfunção no processamento somatossensorial de acordo com Marshall et al.