VEGF 乳腺癌早期成像

试验目的

主要目标 目的是进行可行性研究，以表明使用 89Zr-贝伐珠单抗作为示踪剂的 VEGF PET 成像可用于早期乳腺癌检测。

次要目标次要目标是是否可以检测到阳性淋巴结。

端点

• 主要终点是 89Zr-贝伐单抗示踪剂在 < 2 cm 的原发性乳腺肿瘤中的摄取。
• 次要终点将是腋窝淋巴结中的 89Zr-贝伐单抗示踪剂摄取。

患者选择标准

包容

• 乳腺肿瘤直径小于 2 厘米（通过常规成像技术确定：乳腺 X 线摄影、超声或 MRI）的患者，计划通过乳房切除术或肿块切除术接受手术干预。
• 组织学证实的乳腺癌
• 年龄 > 18 岁。
• WHO 绩效状态 0-2（见：附录 B）
• 在任何研究特定筛选程序之前获得签署的书面知情同意书（由机构审查委员会 [IRB]/独立伦理委员会 [IEC] 批准）。
• 能够遵守协议。

排除

• 其他可能影响方案依从性或结果解释的侵袭性恶性肿瘤或病症。
• 孕妇或哺乳期妇女。 对于生殖器官完整的绝经前妇女和绝经后不到两年的妇女，必须提供妊娠试验阴性的文件。
• 对相关区域进行过放射治疗。
• 研究开始前 28 天内进行过大手术。
• 有临床意义的心血管疾病。
• 对免疫球蛋白或免疫球蛋白过敏的先前过敏反应。

试验设计 所有患者都将在示踪剂注射后第 4 天术前接受 89Zr-贝伐珠单抗 PET 扫描（参见：第 16 节的时间表）。 89Zr-贝伐珠单抗在肿瘤中的摄取将被量化。 结果将被融合并与标准成像技术和标准肿瘤组织学以及血管生成的特定肿瘤染色（包括 VEGF 染色）进行比较。 敏感性和特异性将与传统成像进行比较。

学习评估

89Zr-贝伐珠单抗 PET 显像

贝伐珠单抗的放射性标记 单克隆抗体的偶联和放射性标记基本上按照 Verel 等人 (15) 的描述进行，仅对纯化进行了微小的调整。 简而言之：FTP-N-sucDf-Fe（由荷兰阿姆斯特丹 VU 大学医学中心友情提供）以 10:1 的摩尔比与 mAb 结合。 随后通过过量的 EDTA（Calbiochem，圣地亚哥，加利福尼亚，美国）在 35°C 下去除 Fe（III）30 分钟，并通过超滤（Vivaspin-2 离心浓缩器，过滤器 30 kDa，Sartorius，Göttingen ， 德国）。 这种纯化的抗体要么储存在 -80°C，要么立即用于放射性标记。 偶联抗体加入 89Zr-草酸盐（100-1000 MBq/mg mAb，由荷兰阿姆斯特丹 VU 大学医学中心友情提供）、0.9% NaCl（Braun Melsungen AG，Oss，荷兰）、2M Na2CO3（ OPG Farma, Utrecht, The Netherlands) 和 0.5M HEPES 缓冲液 (Sigma-Aldrich, Zwijndrecht, The Netherlands)。 60 分钟后，放射性标记的抗体通过超滤 Vivaspin-2 离心浓缩器纯化，过滤器 30 kDa，Sartorius，Göttingen，德国）并在 0.9% NaCl/龙胆酸（5 mg/ml，Merck Schuchardt OHG，Hohenbrunn，德国）中稀释. 89Zr 同位素的物理 t ½ 为 78 小时。 89Zr-bevacizumab 的放射化学纯度 >95%，在人血清中具有出色的长期稳定性（> 1 周）。 结合和放射性标记是在 GMP 条件下在核医学和分子成像部门的放射性药物设施中进行的，由医院药剂师负责。 有关 89Zr-bevacizumab 的更多详细信息，请参阅研究性医药产品档案（IMPD；附录 C）。

PET 成像患者将在第 0 天静脉内注射 37 MBq 89Zr-贝伐单抗（蛋白质剂量 5 mg）。随后，将在注射 89Zr-贝伐单抗后 4 天拍摄图像（时间表见第 16 节）。 将使用西门子 PET/CT 相机进行成像。 记录将以 3D 模式从下胸部到颈部进行，大约有 2 个床位。 核医学与分子影像学系已通过 ISO-NEN-9001 标准认证。 动态扫描的标准操作程序将用于所有 PET 扫描。 PET 相机的实际操作和扫描采集将由核医学技术专家执行。 最终图像分析将由核医学专家进行。 89Zr-贝伐珠单抗分布将在视觉上和定量上进行评分。

大多数患者还将在原发肿瘤的手术治疗期间接受前哨淋巴结检测以对腋窝进行分期。 对于前哨节点程序，使用 99mTechnetium 标记的纳米胶体。 89Zr-贝伐珠单抗和 99mTc-纳米胶体给药之间的预期时间约为 2 周。 到那时，89Zr 放射性标记的 7 个半衰期已经过去，其信号可以忽略不计。 因此，预计不会干扰放射性标记信号。

辐射剂量/安全 使用正电子发射同位素意味着暴露于电离辐射。 由于辐射的潜在危害，在“Besluit Stralingsbescherming (BS 2000), artikel 64 - en Nota van Toelichting (Staatsblad 2001, 397)”中指定了健康志愿者暴露的指南，该指南参考了国际委员会的指南辐射防护 (ICRP)。 由于抗体贝伐珠单抗的动力学几乎与曲妥珠单抗相当，因此89Zr标记的贝伐珠单抗的辐射剂量预计与89Zr-曲妥珠单抗的辐射剂量在同一范围内。

为了估计 89Zr-trastuzumab 扫描期间“标准女性”的辐射剂量，使用了来自先前 111In-trastuzumab 平面成像的可用动力学数据。 这是可能的，因为 111In 的半衰期与 89Zr 的半衰期处于同一数量级，因此它使我们能够在与 89Zr 剂量测定相关的时间段内跟踪示踪剂动力学。 使用由 168 小时内 4 次连续平面扫描组成的扫描系列，计算主要源器官和全身的停留时间，并根据核素半衰期的差异进行调整。 这些停留时间被输入到 OLINDA 程序中，该程序使用 MIRD 方案计算有效辐射剂量。 最终估计值是从 5 名不同患者的平均结果中得出的，对于 37 MBq 的注射剂量产生 18 mSv。 在目前的协议中，这将导致女性的辐射剂量（包括低剂量 CT 的衰减校正）为 19.5 mSv（男性为 16.5 mSv）。 根据 ICRP 62，该辐射剂量属于 III 类（中等风险）。

肿瘤染色 除了对术后肿瘤标本进行标准评估外，还将对 VEGF 通路相关蛋白进行特异性染色，包括 VEGF、平均血管密度 (MVD) 的 CD34 染色、血管成熟的 SMA、缺氧的 HIF-1alpha、VEGF 受体, Ki 67 根据最新的科学见解进行增殖或其他相关染色。

临床评估、实验室检查、随访

开始前

• 身体检查
• WHO 绩效评分（见附录 B）
• 乳房的常规成像（乳房 X 光摄影、超声波或 MRI）
• 恶性乳腺病变的组织学证实
• 评估纳入和排除标准
• 签署书面知情同意书

评估标准

PET 扫描 PET 扫描将由对临床信息和肿瘤位置不知情的核医学医师进行评估。 PET 数据将与常规成像数据相关联。 最终的术后病理评估将与PET数据相关。

肿瘤染色 VEGF 相关肿瘤染色的评估将与病理学家合作进行，对临床信息不知情。

统计考虑

在这项可行性研究中，我们将提出很高的要求来证明 89Zr-贝伐珠单抗-PET 扫描检测乳腺癌病变的敏感性，以证明我们最终的未来目标是通过 VEGF 成像在良性和恶变前/恶性病变之间获得良好的区分。 . 使用 89Zr-贝伐珠单抗-PET 扫描检测肿瘤的灵敏度要求非常高，要求灵敏度不低于 99%。

我们将使用 1 型错误为 5%（单侧 alpha 为 5%）和 beta 为 10%（~90% 的幂）的停止规则，假阴性率的外部参考值为 0.01 和替代0.10。 附录 C 中包含对具有两个边界的停止规则的详细描述。

在本研究中，要求 p0=0.01， p1=0.10, 阿尔法（规则）=0.05， beta（规则）=0.10 和阿尔法（徒劳的）= 0.05。 经过精确计算，这导致 alpha(n)=0.1364， β(N)=0.055 alpha(futile,n)=0.6431，最大患者数为 47。 真实故障率为 0.01，通过上限的概率为 0.049；如果真实故障率为 0.10，则此概率为 0.903。 上限表示可接受的最大失败数，在前 35 名患者中有 1 名，在 47 名患者总数中有 2 名。 当在前 31 名患者中未观察到失败时，可以停止使用停止规则进行的监视（因为测试无效）。

研究者授权程序

治疗患者的专家或他/她的研究护士可以为患者进行登记。

患者登记

要在本研究中输入患者，在工作时间内，应通过以下方式联系数据管理员：

University Medical Center Groningen Department of Medical Oncology 电话：050-3612053 或页面编号 77045 将在注册时检查资格。

为确定资格，应提供以下信息：

• 缩写
• 出生日期
• 世卫组织绩效得分
• 签署书面知情同意书
• 预定手术日期（如果知道）

收集数据的表格和程序

数据将收集在纸质病例记录表 (CRF) 上。 将收集 CRF，并将数据匿名输入 Access 数据库中。

受试者身份识别 患者数据存储在没有姓名的代码下，以确保匿名性。

知情同意 所有患者将被告知研究的目的、可能的不良事件、他/她将暴露于的程序和可能的危害以及治疗分配的机制。 他们将被告知其患者数据的严格保密性，但他们的医疗记录可能会由其主治医师以外的授权人员出于试验目的进行审查。 患者知情同意声明的示例作为本协议的附录给出。

UMCG 的伦理委员会将在研究开始前验证当地的知情同意文件。

需要强调的是，参与是自愿的，患者可以随时拒绝进一步参与该方案。 这不会影响患者的后续护理。 在研究中注册或随机分配之前，必须为研究中包括的所有患者获得书面知情同意书。 这必须按照国家和地方法规要求进行。

知情同意程序必须符合 ICH 良好临床实践指南。 这意味着“书面知情同意书应由患者或患者的合法代表签署并亲自注明日期”。