Aktualizace v laboratorní diagnostice VWD

von Willebrandova choroba (VWD) je nejčastější dědičná krvácivá porucha způsobená defekty v množství, struktuře nebo funkci von Willebrandova faktoru (VWF) (1). Prevalence odhadovaná v populačních studiích se pohybuje od 0,6 % do 1,3 %(2). VWD je klasifikován do typu 1 s částečným deficitem VWF, typu 2 s kvalitativními defekty VWF a typu 3 s úplným deficitem VWF (3) (4). . V praxi není rozlišení mezi určitými typy VWD snadné, mohou nastat potíže, protože fenotypy pacientů se mohou v průběhu času měnit, mutace VWF mohou mít komplexní účinky na fenotyp, některé laboratorní testy jsou ze své podstaty nepřesné a hranice mezi normálními a abnormálními fenotypy nemusí být ostře definovaná(3) .Přesná diagnóza je navíc obtížná kvůli variabilitě onemocnění, klinickému projevu a obtížím při standardizaci panelu diagnostických testů(4) (5). Testy první úrovně jsou antigen VWF (VWF: Ag), vazba (aktivita) krevních destiček VWF a aktivita faktoru VIII (FVIII:C), zatímco testy druhé úrovně zahrnují vazbu kolagenu VWF (VWF:CB), vazebnou kapacitu FVIII (VWF:FVIIIB) a agregometrii krevních destiček indukovanou ristocetinem (RIPA ) a multimerní analýza(6). Nejnovější oficiální klasifikace VWD označuje multimerní profil VWF jako nedílnou součást diagnostického procesu (5, 7, 8). Pérez-Rodríguez et al. a jeho kolegové rozdělili roli multimerní analýzy do tří různých kategorií: 1) Velký význam; multimerní analýza byla nezbytná pro stanovení jasné diagnózy; 2) Konkordant ; jakmile byla stanovena jasná diagnóza pomocí jiných testů, multimerická analýza s takovou diagnózou souhlasila; 3) Neinformativní: multimerická analýza neposkytla informace pro diagnózu(8). Výsledky multimerů u 54,6 % pacientů Pérez-Rodríguez A et al. ukázaly velký význam v diagnostice. Role genetické analýzy VWF je ošemetná; Není to rutinně indikováno, ale za určitých okolností může být povinné, tj. když by výsledek testu ovlivnil pacientovu volbu léčby a vhodné fenotypové testy nejsou dostupné jako u typu 2N a 2B VWD (9). Nicméně existuje několik důvodů pro provádění molekulární analýzy u pacientů fenotypicky dobře charakterizovaných, např. potvrdit fenotypovou diagnózu pacienta(9), pomoci při identifikaci patologického mechanismu za určitými defekty nebo může pomoci při volbě léčby a při poradenství ohledně dědičnosti(5). Příklady dědického poradenství jsou: prenatální diagnostika typu 3 nebo závažného typu 1(9) a identifikace stavu přenašeče mezi rodinnými příslušníky, který lze snadno rozpoznat, jakmile byla identifikována mutace (mutace) probanda (10). Mutace identifikované u VWD typu 3 jsou často jasně mutace způsobující onemocnění (nesmysl, posun čtecího rámce a velké delece), zatímco u VWD typu 1 jsou často identifikovány missense mutace, které lze považovat pouze za kandidátské mutace kvůli nedostatku pevných důkazů. jejich kauzální účinek. Přístup ke zkoumání genových mutací způsobujících typy 1 a 3 je podobný a je sofistikovaný, protože neexistuje žádná konkrétní oblast, kde by byly identifikovány mutace, na rozdíl od VWD typu 2, která vyžaduje pouze vyhodnocení exonů kódujících konkrétní funkční doménu (domény). ) a velká většina mutací se nachází v exonu 28. Tuto strategii lze použít pro všechny VWD typu 2 (2A, 2B, 2M a 2N) (tabulka 1) (11).

VWD typ 2A(IIA) 2A(IIE) 2A*(IIC) 2A(IID) 2B 2M 2M(CB) 2N* Doména A2 D3 D1-D2 CK A1 A1 A3 D'-D3 Exon 3' část z 28 22, 25 -27 a 5' část 28 2-17 51-52 5' část 28 5' část 28 29-32 17-25