Sfingo-lipotoxicita a trans-diferenciace tukové tkáně při obezitě (SFINGOTRANS) (SFINGOTRANS)

Materiál a metody Pacienti: Bude přijato 90 dospělých obou pohlaví, z toho 30 s normální hmotností (věk: 18-50 let; BMI < 25 kg/m2), 30 obézních bez metabolického syndromu (věk: 18-35 let; BMI > 35 kg/m2) a 30 obézních s metabolickým syndromem (věk: 18-35 let; BMI > 35 kg/m2), podle kritérií IDF z roku 2009. Subjekty s normální hmotností budou vybrány z řad lékařského/nelékařského personálu, zatímco obézní pacienti z hospitalizovaných v Divize metabolických chorob, Istituto Auxologico Italiano, Piancavallo (VB), Itálie, do 3týdenního multidisciplinárního programu snižování hmotnosti (BWRP), který zahrnuje nízkokalorickou dietu, fyzické cvičení, psychickou podporu a nutriční vzdělávání.

Subjekty s jinými patologiemi než je obezita budou ze studie vyloučeny, včetně těch, kteří jsou léčeni antikoagulačními a protidestičkovými léky, protože se předpokládá hodnocení intraagregačních hladin sfingolipidů.

V bazálních podmínkách budou sbírány hlavní antropometrické údaje (váha, výška, obvod pasu, obvod boků, BMI), bioimpedanční technikou bude hodnocena tělesná skladba, budou zaznamenávány hlavní kardiovaskulární parametry (krevní tlak a srdeční frekvence), bude provedeno kalorimetrické vyšetření, měření tělesné teploty (ráno a večer), požadavek na teplotu prostředí, které je člověk během dne obecně vystaven a pomocí automatizovaných technik klinické biochemie stanoveny tyto biochemické parametry: glukóza, celkový cholesterol, triglyceridy, LDL, HDL, mastné kyseliny neesterifikované, inzulín, glykovaný Hb, katecholaminy a C-reaktivní protein.

Stanovení lipidomického profilu v plazmě a buněčných extraktech A lipidomika bude provedena v plazmě a v buněčných extraktech z erytrocytů, leukocytů a krevních destiček. Hladiny jednotlivých analytů budou stanoveny technologicky vyspělou analytickou instrumentací, sestávající z trojitého čtyřnásobného hybridního hmotnostního spektrometru s lineární iontovou pastí (QTRAP 5500, AB Sciex), propojeného s ultra-vysokoúčinným kapalinovým chromatografem (UHPLC).

Budou měřeny plazmatické a buněčné hladiny následujících sfingolipidů: ceramidy a dihydroceramidy od C16 do C24, včetně 2 nenasycených (C18:1 a C24:1), sfingomyeliny (ty od C16 do C24 a jeden C24:1), sfingosin, sfinganin, sfingosin-1-fosfát a sfinganin-1-fosfát.

Stanovení hladin leukocytární mRNA genových regulátorů Z alikvotu obsahujícího leukocyty, uloženého ad hoc, bude extrahována celková mRNA a pomocí techniky RT/PCR budou stanoveny hladiny leukocytární mRNA následujících genů: Cidea, Hoxc9 a Cpt1a.