Sfingo-lipotossicità e trans-differenziazione del tessuto adiposo nell'obesità (SFINGOTRANS) (SFINGOTRANS)

Materiali e metodi Pazienti: Verranno reclutati 90 adulti di entrambi i sessi, di cui 30 normopeso (età: 18-50 anni; BMI < 25 kg/m2), 30 obesi senza sindrome metabolica (età: 18-35 anni; BMI > 35 kg/m2) e 30 obesi con sindrome metabolica (età: 18-35 anni; BMI > 35 kg/m2), secondo i criteri IDF 2009. I soggetti normopeso saranno reclutati da personale medico/paramedico, mentre i pazienti obesi da ricoverati presso la Divisione di Malattie del Metabolismo, Istituto Auxologico Italiano, Piancavallo (VB), Italia, per un programma di riduzione del peso multidisciplinare di 3 settimane (BWRP), che comprende dieta ipocalorica, esercizio fisico, supporto psicologico ed educazione alimentare.

Saranno esclusi dallo studio soggetti con altre patologie diverse dall'obesità, compresi quelli trattati con farmaci anticoagulanti e antiaggreganti piastrinici, in quanto sarà prevista la valutazione dei livelli intrapiastrinici degli sfingolipidi.

In condizioni basali verranno raccolti i principali dati antropometrici (peso, altezza, circonferenza vita, circonferenza fianchi, BMI), verrà valutata la composizione corporea con tecnica di bioimpedenza, verranno registrati i principali parametri cardiovascolari (pressione arteriosa e frequenza cardiaca), verrà eseguito un esame calorimetrico, rilevazione della temperatura corporea (mattina e sera), richiesta della temperatura ambientale a cui si è generalmente esposti durante il giorno e determinazione, con tecniche automatizzate di biochimica clinica, dei seguenti parametri biochimici: glucosio, colesterolo totale, trigliceridi, LDL, HDL, acidi grassi non esterificati, insulina, Hb glicata, catecolamine e proteina C-reattiva.

Determinazione del profilo lipidomico nel plasma e negli estratti cellulari Verrà effettuata una lipidomica nel plasma e negli estratti cellulari di eritrociti, leucociti e piastrine. I livelli dei singoli analiti saranno determinati con una strumentazione analitica tecnologicamente avanzata, costituita da uno spettrometro di massa ibrido triplo quadruplo con trappola ionica lineare (QTRAP 5500, AB Sciex), interfacciato con un cromatografo liquido ad altissime prestazioni (UHPLC).

Saranno misurati i livelli plasmatici e cellulari dei seguenti sfingolipidi: ceramidi e diidroceramidi da C16 a C24, di cui 2 insaturi (C18:1 e C24:1), le sfingomieline (quelle da C16 a C24 e quella C24:1), sfingosina, sfinganina, sfingosina-1-fosfato e sfinganina-1-fosfato.

Determinazione dei livelli di mRNA leucocitari dei regolatori genici Da un'aliquota contenente leucociti, immagazzinata ad hoc, verrà estratto l'mRNA totale e, con tecnica RT/PCR, verranno determinati i livelli di mRNA leucocitari dei seguenti geni: Cidea, Hoxc9 e Cpt1a.