열성 이영양성 수포성 표피박리증(RDEB) 넌센스 돌연변이 환자를 위한 겐타마이신 요법

국소 및 피내 겐타마이신 치료로 C7 및 AF 발현 평가 피부 병변에 대한 겐타마이신의 국소 적용: 시중에서 판매되는 겐타마이신 0.1% 연고를 Tegaderm 폐색 상태에서 2주 동안 대상 RDEB 피부 미란에 하루 세 번 적용합니다. 마찬가지로 비슷한 크기의 RDEB 침식에 하루 세 번 연고 조절 비히클을 적용합니다. 이 투여 일정은 부작용 없이 임상적 효능을 가져온 CF 환자의 성공적인 임상 시험을 기반으로 합니다.19 체외 세포 배양 연구에서 우리는 단일 용량의 겐타마이신(400 ug/ml)이 정상 세포에서 보이는 것의 20-40% 수준으로 C7 발현을 유도한다는 것을 보여주었습니다(그림 1A 및 1B).23 임상 시험에서 실험용 연고는 연고 비히클 밀리리터당 겐타마이신 1밀리그램을 포함합니다.

RDEB 환자 피부의 높은 진피에 겐타마이신 주입: 또한 물집이 생기기 쉬운 부위 내에서 상처가 나지 않은 온전한 피부의 2.0 cm x 2.0 cm 표적 부위를 확인하고 시중에서 구할 수 있는 멸균 겐타마이신 용액(40 mg/ml 식염수)을 피내 주사합니다. ). 유사한 제어 영역에 동일한 양의 식염수를 주입합니다. 0일에 한 번, 1일에 다시 한 번 각 부위에 200ul(8밀리그램)을 주입합니다. 2일 각각에 단일 주사가 부위에 투여될 것이다. 총 투여량은 환자의 진피 섬유아세포 및 기저 각질세포와 접촉하는 상부 진피에 16밀리그램을 주입하는 것입니다. 발표된 체외 판독 연구에서 배양된 세포의 각 1 cm2는 cytoxocity 없이 판독 활성을 나타내는 400 ugs/ml의 겐타마이신에 노출되었습니다. 제안된 피내 연구를 위해 우리는 체외 투여량보다 약 5배 더 많은 총 투여량을 사용할 것입니다.

초기 및 후속 매개변수: 모든 치료에 앞서 RDEB 환자는 3개 부분으로 나누어 H&E 조직학, 투과 전자 현미경 및 C7 발현에 대한 직접 면역형광에 대해 평가될 온전한 피부의 9mm 면도 생검을 받게 됩니다. RDEB 미란 또는 물집이 생기기 쉬운 부위의 온전한 피부에 대한 겐타마이신 치료 후 1개월 및 3개월에 치료 부위를 생검하고 조직학적, 미세구조 및 C7 발현 평가를 반복합니다. 면역형광(IF)에 의한 DEJ에서의 C7 발현의 평가를 위해, 5미크론 저온 절편은 C7의 NC1 및 NC2 도메인에 대한 항-C7 폴리클로날 항체로 조사될 것이다. 겐타마이신 처리된 피부 또는 미란의 DEJ에서 C7의 NC2 도메인의 증가된 발현은 PTC 판독 및 전체 길이 C7의 복원을 나타낼 것이기 때문에 이 연구에서 하나의 주요 "이정표" 역할을 할 것입니다. 생검의 세 번째 부분은 초구조적으로 평가되고 AF는 컴퓨터 지원 형태 측정법으로 열거됩니다. 이 연구는 정상적인 AF의 회복이 있는지 평가할 것입니다. 비히클 제어 사이트의 피부 섹션이 음성 컨트롤 역할을 하는 동안 정상 인간 대상의 피부 섹션은 양성 컨트롤 역할을 합니다.

환자 임상 평가: 피부 침식 부위: 환자는 실험 부위 및 대조군 부위의 겐타마이신 및 비히클 처리에 대해 눈이 멀게 됩니다. 매주 환자는 부위를 평가하고 다음과 같이 치유 등급을 매깁니다. - 1 = 초기 크기와 비교하여 미란의 확대; 0 = 침식 크기의 변화 없음; +1 = 부분 치유 및 초기 크기보다 작은 미란, +2 = 상처의 완전한 봉합.

둘째, 침식의 기준선 사진이 생성되고 침식 면적이 컴퓨터 보조 측량법으로 계산됩니다. 치료 후 1개월 및 3개월에 동일한 평가가 이루어집니다. 따라서, 이 연구의 두 번째 "이정표"는 비히클 제어 처리 침식과 비교하여 겐타마이신 처리 침식의 표면적 감소입니다.

겐타마이신의 피내 주사로 치료된 RDEB 온전한 피부의 평가: 환자 및 조사자는 실험 영역 및 제어 영역의 치료에 대해 눈이 멀게 됩니다. 매주 환자는 영역을 평가하고 다음과 같이 등급을 매깁니다. - 1 = 해당 부위에 새로운 수포 또는 미란 형성, +1 = 새로운 수포 또는 미란 없음. USC 방문 1개월 및 3개월에 생검을 부위에서 얻고 DEJ에서의 C7 발현 및 AF 열거에 대해 위와 같이 평가할 것입니다.

환자의 안전성 평가: 환자는 치료 전 0일, 치료 1일 후, 치료 1일 및 3일에 기본 병력, 시스템 검토(ROS), 활력 징후(체중 포함) 및 신체 검사를 받게 됩니다. USC를 방문하는 동안 몇 달. 이 같은 시점에서 혈액 검사가 수행되며 전체 혈구 수, 전해질, 간 효소, 적혈구 침강 속도, 크레아티닌 및 BUN이 포함됩니다. 크레아티닌 클리어런스도 계산되고 환자의 치료 부위에 홍반, 부종, 수포 및 미란이 있는지 평가됩니다. 치료 후 0일, 1개월 및 3개월에 청력 평가를 실시합니다. 환자는 집에서 매일 ROS 설문지를 작성하고 새로운 징후, 증상 또는 ROS 변화에 대해 문의하는 USC 연구 회원이 매주 전화를 겁니다.

E. 겐타마이신-유도된 C7에 대한 면역 반응의 특성화: 본 연구 환자들은 모두 C7의 가장 항원성이 높은 도메인인 NC1 도메인을 포함하여 더 낮은 수준의 C7을 발현합니다. 따라서 환자 B를 제외하고 환자의 PTC를 통한 판독이 환자의 면역 체계에 의해 항원으로 간주되는 단백질을 유도할 것인지 의심합니다. 그럼에도 불구하고 우리는 겐타마이신이 기능적이지 않고 기능적인 C7 종을 생성하기를 희망합니다. 이 변화가 면역 반응을 유발하고 항-C7 항체를 생성하는지 평가하기 위해 염 분할 IIF 및 ELISA로 항-C7 항체를 평가하기 위해 기준선, 1개월 및 3개월에 환자 혈청을 얻을 것입니다. 환자에게 C7에 대한 항체가 생기면 DIF를 통해 피부에 C7 항체 침전물이 있는지 검사합니다.