직접 항바이러스제(DAA) 요법에 대한 무반응에서 숙주 면역의 역할

연구 목적 및 가설 프로젝트의 기본 가설은 만성 HCV 감염에서 항바이러스 면역 기능 장애의 수준이 치료에 대한 무반응에 영향을 미칠 수 있는 원인 인자라는 것입니다. 그러나 DAA 치료를 시작하기 전에 순진한 만성 HCV 환자가 나타내는 개별 항바이러스 T 세포 반응의 특징에 대한 정보는 후속 치료 결과 및 감염 통제 실패에 미치는 영향과 관련하여 사용할 수 없습니다. 만성 HCV 감염에서 항HCV 면역 반응에 대한 몇 가지 가능한 결과는 결과에 따른 평가 없이 현재 지침에 포함되지 않은 DAA 요법으로 치료받은 환자에서 생성되었습니다. 따라서 본 연구의 목적은 반응자 및 비반응자 환자의 두 그룹에서 개별 HCV 특이 T 세포 반응을 비교하여 치료에 대한 무반응이 더 넓고 깊은 항바이러스 면역 기능 장애와 관련이 있는지 여부를 이해하는 것입니다. 가정은 DAA 치료에 대한 반응 실패와 관련된 T 세포 반응의 가능한 결함이 비효과적인 치료 주기가 끝난 후 비반응 환자의 면역학적 배경을 특성화하고 결과를 이후에 바이러스를 제거하는 순진한 바이러스혈증 환자의 기본 전처리 반응과 비교하십시오. 무반응 환자에 대한 치료 전 분석도 충분한 수의 무반응 환자를 식별하기 위해 엄청난 수의 순진한 환자를 등록해야 하므로 연구가 불가능하고 지나치게 길어집니다. 이 전략에 따르면 기준선에 등록된 대부분의 환자가 반응자일 것으로 예상되는 반면 치료 종료 후 6~12개월의 적절한 휴약 기간 후 연구될 비반응자 환자가 될 것으로 예상되기 때문에 모집이 매우 빨라질 것입니다. 재치료 시작은 협력 센터에서 이미 확인되었으며 프로토콜이 승인되는 즉시 연구에 사용할 수 있습니다. 결과에 기초하여 향후 분석의 가능한 목적은 비반응 환자의 T 세포 기능 결함을 분자 수준에서 추가로 특성화하여 교정이 효율적인 항염증제를 유도/복구하는 실행 가능한 접근 방식을 나타낼 수 있는지 여부와 그 전략을 정의하는 것일 수 있습니다. -마지막 세대 DAA의 효과를 보완하고 강화하기 위한 바이러스 반응. 마지막으로, 무반응 환자의 보호 면역 특성화는 일상적인 임상 실습에서 사용되는 치료에 대한 무반응의 기준선 예측 인자를 식별할 수 있게 합니다.

연구 배경 IFN-free DAA로 치료받은 순진한 비간경변증 환자의 지속적인 바이러스 반응(SVR) 비율은 95%~100%이지만 유전자형 3형 간경변증 환자와 감염 유전자형에 관계없이 보상되지 않은 간경변증. DAA 기반 치료법의 높은 효능은 등록 연구보다 SVR률이 약간 낮은 실제 코호트에서 확인되었습니다. DAA 요법에 대한 실패율은 매우 제한적이지만(약 5%), 치료가 필요한 만성 HCV 감염 환자의 수가 많기 때문에 무반응 환자의 전체 수는 높을 것으로 예상됩니다. 치료 실패는 가장 빈번하게 재발을 초래하고 덜 자주 치료 중 바이러스 돌파를 초래합니다. 내성 돌연변이의 출현, 부정확한 유전자형 정의로 인한 최적이 아닌 치료 및 진행된 간 질환을 포함하여 치료에 대한 무반응에 연루된 다른 요인이 있는 것으로 여겨집니다.

치료 실패를 결정하는 기준선 RAV의 역할은 여전히 ​​논의되고 있으며 기준선 내성 테스트는 임상적 유용성이 제한적인 것으로 보입니다. 대신, DAA 기반 요법 중 RAV의 출현과 바이러스학적 실패를 결정하는 역할은 잘 문서화되어 있습니다. 약물 내성 변이체가 많은 비율의 무반응 환자에서 검출되더라도 치료 효능을 손상시키는 역할은 완전히 명확하지 않습니다.

HCV 유전자형 분석을 위해 현재 이용 가능한 2세대 상용 분석법을 사용하면 유전자형 오분류의 위험이 줄어들지만, 임상 실습에 적용되는 방법의 민감도 미만인 비율의 서로 다른 유전자형/아형의 혼합 감염 가능성은 여전히 ​​가능합니다. 최적이 아닌 치료로 인해 치료에 반응하지 않는 원인.

그러나 잘못된 유전자형 검출로 인한 저항성 변종의 출현과 차선의 치료는 치료 실패 사례의 일부만을 설명할 수 있으며 숙주 관련 요인, 특히 항바이러스 면역 반응이 역할을 할 수 있습니다. 실제로, 선천적 및 후천적 면역 반응은 만성 HCV 감염에서 심하게 손상되는 것으로 알려져 있지만 배경 면역 반응이 DAA 치료의 최종 결과에 기여할 수 있는 가능성에 대한 정보는 매우 제한적입니다. PegIFN 기반 요법과 달리, DAA 치료 환자에 대한 최근 연구에서는 HCV 특이 CD8 세포의 빈도와 기능이 소진된 표현형의 부분적 역전과 함께 IFN 없는 요법에서 증가할 수 있음을 나타냅니다. 또한, DAA 요법은 만성 HCV 환자에게 전형적인 NK 세포 활성화 표현형을 교정하는 NK 세포 구획을 조절할 수 있습니다. 따라서, 항바이러스성 면역의 기준선 장애 수준은 기준선 면역 억제가 더 깊고 더 넓을 때 DAA 치료에 대한 내성 가능성이 더 높은 치료 시 면역 회복의 차후 가능성에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 가설은 테스트가 필요합니다.

1차 종점 연구의 목적은 비반응 환자(검출 가능 여부에 관계없이)에서 전체 HCV 특이 T 세포 반응의 강도(항바이러스 기능의 총 수준) 및 품질(다중특이성 및 다중기능성)을 비교하는 것입니다. 저항 관련 변이체 - RAV) 및 DAA 요법에 대한 반응자. 이 목표를 달성하기 위해 CD4- 및 CD8-매개 반응은 사이토카인 생산(IL2, IFN- g 및 TNF-a) 및 세포독성 가능성(CD107 탈과립).

• 1차 종점으로서, T 세포 반응의 전체 강도는 반응자 및 비반응자 환자에서 평가될 것이다; 개별 T 세포 반응성의 총 강도는 각각의 개별 반응자 및 비반응자 환자에 대한 상이한 분석된 T 세포 매개변수(총 CD3 세포 및 CD4/CD8 서브세트에서 검출된 바와 같은 사이토카인 생성 및 세포독성)를 합산함으로써 정의될 것이다; 결과 값은 두 환자 그룹에서 비교됩니다.
• 분석의 두 번째 수준에서 반응자와 비반응자 사이의 T 세포 반응성의 질적 차이는 각 개별 기능의 발현을 개별적으로 비교하여 HCV 특정 T 세포 반응의 다중 기능 및 다중 특이성 측면에서 평가됩니다. (IL2, IFN-g, TNF-a) 및 두 그룹의 환자에서 T 세포 반응을 유도하는 각 개별 HCV 단백질의 능력.

HCV 특이적 T 세포 반응의 특성화.

1. 구조적 및 비구조적 HCV 단백질에 대한 전체 CD4+ 및 CD8+ 반응성을 분석하기 위해 전체 HCV(유전자형 1) 서열을 포괄하는 겹치는 15-mer 펩티드의 포괄적인 패널이 사용됩니다. T 세포 반응은 IFN-g, IL-2 및 TNF-a 및 탈과립(CD107의 상향 조절)에 대한 유세포 분석 세포내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 시험관 내(펩티드 자극 10일 후) 및 IFN-g 생체 외(단기 펩티드 자극 후)에 대한 Elispot; HLA 클래스 I- 및 클래스 II-제한 특이성을 갖고 다른 HCV 비관련 바이러스 및 병원체(CMV, EBV, FLU)에 대한 CD8+ 및 CD4+ 반응의 표적으로 알려진 합성 펩티드 에피토프를 대조군으로 사용할 것이다.
2. CD8+ T 세포 반응성을 추가로 분석하기 위해 가장 널리 알려진 HCV의 HLA-A2 제한 에피토프 중 일부를 포함하는 HLA-A2/펩티드 덱스트라머를 HLA-A2+ 환자에게 사용하여 순환하는 바이러스 특이 CD8+ 세포를 정량화하고 덱스트라머-양성 CD8+ 세포 주파수를 생체 외 및 펩티드 자극 10일 후 비교.
3. 내성 돌연변이의 출현을 보이는 무반응 환자에서 변이체 서열에 해당하는 특정 펩타이드가 합성되어 출현하는 돌연변이가 HCV 특이 T 세포 활성화 및 기능에 영향을 미칠 수 있는지 여부를 분석하는 데 사용됩니다. 이를 위해 프로토타입 및 변이체 펩타이드의 서로 다른 T 세포 기능(사이토카인 생성, 세포독성, 확장능)에 대한 자극 효과를 비교합니다.

보조 종점

1. 바이러스 감염 제어 및 T 세포 반응 조절과 관련된 것으로 알려진 추가 면역 집단 및 혈청 인자 분석.

   • 자연 살해(NK) 세포 분석: NK 세포 표현형은 특정 마커, 예를 들어 CD16, NKG2A/D, TRAIL, NKP46/NKP30, Ki67, CD38/HLA-DR과 같은 특정 마커의 발현을 유세포 분석법으로 평가하여 연구합니다. NK 세포 기능은 적절한 자극과 함께 밤새 PBMC 인큐베이션 시 IFN-g/TNF-a 생산 및 CD107 탈과립을 시험함으로써 연구될 것이다.
   • T 조절 세포(Treg)의 분석: 빈도, 표현형 및 기능은 CD3, CD4, CD25, FoxP3 및 CD45RA로 동시 염색된 전체 PBMC에서 연구될 것입니다.
   • IL15, IL6, CXCL9, CXCL10, IFN-g 및 IL28을 포함한 사이토카인, 케모카인 및 ISG의 혈청 농도는 Luminex 기술로 환자의 혈청에서 분석됩니다.
2. DAA 요법에 대한 무반응의 기준선 예측 인자 식별 프로테아제 억제제를 사용하거나 사용하지 않는 요법에 대한 무반응에서 항바이러스 면역 반응이 가질 수 있는 영향의 설명