直接抗ウイルス剤(DAA)療法に対する無反応における宿主免疫の役割
DAA療法に対する無反応における宿主免疫の役割
抗ウイルス、C 型肝炎ウイルス (HCV) 特異的免疫 T 細胞応答は、慢性 C 型肝炎患者の機能に欠陥があり、この機能障害がウイルスの持続性に寄与すると考えられています。 高いウイルス負荷への持続的な曝露は、T 細胞機能不全の病因に関与している可能性があります。 このプロジェクトの根底にある仮説は、慢性HCV感染における抗ウイルス免疫機能不全のレベルが、治療に対する無反応に影響を与える可能性のある原因因子であるというものです。
直接抗ウイルス剤 (DAA) 療法に対する反応率は、未治療の非肝硬変患者では 95% から 100% の間ですが、遺伝子型 3 の肝硬変患者や感染遺伝子型に関係なく、非代償性肝硬変の患者。
したがって、本研究の目的は、レスポンダー患者とノンレスポンダー患者の 2 つのグループにおける個々の HCV 特異的 T 細胞応答を比較することにより、治療に対する非応答がより広範で深い抗ウイルス免疫機能障害と関連しているかどうかを理解することです。 非応答患者における防御免疫の特徴付けにより、日常の臨床診療で使用される治療に対する非応答のベースライン予測因子を特定できる可能性があります。
この研究の目的は、DAA療法に反応しない患者と反応する患者における全体的なHCV特異的免疫T細胞反応の特徴(強度と質)を比較することです。 この目標を達成するために、患者の末梢血から分離された T リンパ球 (CD4 または CD8) は、DAA 療法を開始する前に、HCV タンパク質で刺激され、これらの細胞が増殖し、サイトカインを産生し、細胞毒性を発現する能力を評価します。
調査の概要
詳細な説明
研究の目的と仮説 プロジェクトの根底にある仮説は、慢性HCV感染における抗ウイルス免疫機能不全のレベルが、治療に対する無反応に影響を与える可能性がある原因因子であるということです。 ただし、DAA 療法を開始する前にナイーブな慢性 HCV 患者によって発現される個々の抗ウイルス T 細胞応答の特徴に関する情報は、治療のその後の結果と、感染を制御できない場合の影響の可能性に関連して利用できません。 慢性 HCV 感染症における抗 HCV 免疫応答に関する利用可能な結果は、DAA レジメンで治療された患者で得られたものであり、結果に応じた評価なしでは現在のガイドラインには含まれていません。 したがって、本研究の目的は、レスポンダー患者とノンレスポンダー患者の 2 つのグループにおける個々の HCV 特異的 T 細胞応答を比較することにより、治療に対する非応答がより広範で深い抗ウイルス免疫機能障害と関連しているかどうかを理解することです。 DAA 療法に応答しないことに関連する T 細胞応答の欠陥の可能性は、効果のない治療サイクルの終了後に非応答患者の免疫学的背景を特徴付けることができるように、効果のない治療によって実質的に変更されるべきではないという仮定が立てられています。結果を、後にウイルスを除去したナイーブでウイルス血症の患者のベースライン前治療反応と比較します。 非応答者患者の治療前分析でも、十分な数の非応答者患者を特定するために膨大な数のナイーブ患者を登録する必要があり、研究は実行不可能で非常に長くなります. この戦略により、ベースラインで登録されたほとんどの患者がレスポンダーであると予想される一方で、治療の終了後および6〜12か月の適切なウォッシュアウト期間の後に研究される非レスポンダー患者であるため、採用は非常に迅速になります。再治療の開始は、協力センターですでに特定されており、プロトコルが承認され次第、すぐに研究に利用できるようになります。 結果に基づいて、将来の分析の可能な目的は、非レスポンダー患者のT細胞機能障害を分子レベルでさらに特徴付けて、それらの修正が効率的な抗ウイルスを誘導/回復するための実行可能なアプローチを表すことができるかどうか、およびどの戦略によって表すことができるかを定義することです。 -前世代のDAAの効果を補完および強化するためのウイルス反応。 最後に、非応答患者における防御免疫の特徴付けにより、毎日の臨床診療で使用される治療に対する非応答のベースライン予測因子を特定できる可能性があります。
研究の背景 IFN を含まない DAA で治療されたナイーブな非肝硬変患者における持続ウイルス反応 (SVR) の割合は 95% から 100% の間ですが、遺伝子型 3 の肝硬変患者および感染遺伝子型に関係なく、非代償性肝硬変。 DAA ベースの治療の高い有効性は、実際のコホートで確認されており、登録研究よりもわずかに低い SVR 率を示しています。 DAA 療法の失敗率は非常に限られていますが (約 5%)、治療を必要とする慢性 HCV 感染患者の数が多いため、応答しない患者の総数は多いと予想されます。 治療の失敗は最も頻繁に再発をもたらし、治療中のウイルスのブレークスルーはそれほど頻繁ではありません. 耐性変異の出現、不正確な遺伝子型の定義による最適でない治療、進行した肝疾患など、さまざまな要因が治療に反応しないことに関与していると考えられています。
治療の失敗を決定する際のベースラインRAVの役割はまだ議論されており、ベースライン耐性試験は臨床的有用性が限られているようです. 代わりに、DAAベースのレジメン中のRAVの出現と、ウイルス学的失敗の決定におけるその役割は十分に文書化されています。 薬剤耐性変異体が無反応患者の大部分で検出されたとしても、治療効果を損なうそれらの役割は完全には明らかではありません。
HCVジェノタイピングのための現在利用可能な第2世代の商用アッセイの使用により、遺伝子型の誤分類のリスクが減少しましたが、臨床診療で適用される方法の感度を下回る異なる遺伝子型/サブタイプの割合による混合感染の可能性は依然としてあります.最適でない治療による治療に反応しない原因。
しかし、耐性株の出現と、遺伝子型の検出が正しくないことによる次善の治療は、治療失敗例の一部しか説明できず、宿主関連の要因、特に抗ウイルス免疫応答が役割を果たす可能性があります。 実際、自然免疫応答および適応免疫応答は、慢性 HCV 感染で大きく損なわれることが知られていますが、バックグラウンド免疫応答が DAA 治療の最終結果に与える可能性のある寄与については、非常に限られた情報しか入手できません。 PegIFN ベースの治療とは対照的に、DAA 治療を受けた患者を対象とした最近の研究では、HCV 特異的 CD8 細胞の頻度と機能が IFN を使用しない治療下で増加し、消耗した表現型が部分的に逆転することが示されています。 さらに、DAA療法は、慢性HCV患者に典型的なNK細胞活性化表現型を修正するNK細胞コンパートメントを調節することができます。 したがって、抗ウイルス免疫のベースライン障害のレベルは、ベースラインの免疫抑制がより深く、より広くなると、DAA治療に対する耐性の可能性が高くなり、治療後の免疫回復の可能性に影響を与える可能性があります. この仮説はテストする必要があります。
主要エンドポイント 研究の目的は、非応答者(検出可能なものを含むものと含まないもの)の患者における全体的なHCV特異的T細胞応答の強度(抗ウイルス機能の合計レベル)と質(多特異性および多機能性)を比較することです。耐性関連バリアント - RAVs) および DAA 療法へのレスポンダー。 この目標を達成するために、サイトカイン産生 (IL2、IFN- g および TNF-a) および細胞毒性の可能性 (CD107 脱顆粒)。
- 主要なエンドポイントとして、T 細胞応答の全体的な強度は、レスポンダー患者と非レスポンダー患者で評価されます。個々のT細胞反応性の総強度は、個々のレスポンダーおよび非レスポンダー患者ごとに、分析されたさまざまなT細胞パラメーター(総CD3細胞およびCD4 / CD8サブセットで検出されるサイトカイン産生および細胞毒性)を合計することによって定義されます。結果の値は、患者の 2 つのグループで比較されます。
- 分析の第 2 レベルでは、個々の機能の発現を個別に比較することにより、HCV 特異的 T 細胞応答の多機能性および多特異性に関して、レスポンダー患者と非レスポンダー患者の間の T 細胞反応性の質的差異を評価します。 (IL2、IFN-g、TNF-a) および 2 つの患者群における T 細胞応答を誘導する個々の HCV タンパク質の能力。
HCV 特異的 T 細胞応答の特徴付け。
- 構造的および非構造的 HCV タンパク質に対する CD4+ および CD8+ の全体的な反応性を分析するために、HCV (遺伝子型 1) 配列全体をカバーする重複 15-mer ペプチドの包括的なパネルが使用されます。 T細胞応答は、IFN-g、IL-2、およびTNF-aについて、および脱顆粒(CD107のアップレギュレーション)について、フローサイトメトリーによる細胞内サイトカイン染色(ICS)によって分析されます(ペプチド刺激の10日後)。 IFN-g ex-vivo の Elispot (短期間のペプチド刺激後); HLA クラス I およびクラス II 制限特異性を持ち、HCV とは無関係のさまざまなウイルスおよび病原体 (CMV、EBV、FLU) に対する CD8+ および CD4+ 応答の標的であることが知られている合成ペプチドエピトープをコントロールとして使用します。
- CD8+ T 細胞の反応性をさらに分析するために、HCV の最も広く認識されている HLA-A2 制限エピトープのいくつかを含む HLA-A2/ペプチド デキストラマーを HLA-A2+ 患者に使用して、循環ウイルス特異的 CD8+ 細胞を定量化し、増殖能を測定します。 ex-vivo とペプチド刺激の 10 日後のデキストラマー陽性 CD8+ 細胞頻度の比較。
- 耐性変異の出現を示す非レスポンダー患者では、バリアント配列に対応する特定のペプチドが合成され、出現する変異がHCV特異的T細胞の活性化と機能に影響を与える可能性があるかどうかを分析するために使用されます。 この目的のために、プロトタイプおよびバリアント ペプチドの異なる T 細胞機能に対する刺激効果 (サイトカイン産生、細胞毒性、増殖能) を比較します。
二次エンドポイント
ウイルス感染の制御と T 細胞応答の調節に関連することが知られている追加の免疫集団と血清因子の分析。
- ナチュラル キラー (NK) 細胞分析: NK 細胞の表現型は、フローサイトメトリーによって CD16、NKG2A/D、TRAIL、NKP46/NKP30、Ki67、CD38/HLA-DR などの特定のマーカーの発現を評価することによって研究されます。 NK細胞機能は、適切な刺激を用いて一晩PBMCをインキュベーションして、IFN-g/TNF-α産生およびCD107脱顆粒を試験することによって研究される。
- 制御性T細胞(Treg)の分析:CD3、CD4、CD25、FoxP3、およびCD45RAで共染色されたPBMC全体で、頻度、表現型、および機能が研究されます。
- IL15、IL6、CXCL9、CXCL10、IFN-g、IL28 などのサイトカイン、ケモカイン、ISG の血清濃度は、Luminex 技術によって患者の血清で分析されます。
- DAA 療法に反応しないベースライン予測因子の同定 抗ウイルス免疫反応が、プロテアーゼ阻害剤を含むまたは含まない治療法に反応しない場合の影響の解明
研究の種類
入学 (実際)
段階
- 適用できない
連絡先と場所
研究場所
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-
Parma、イタリア、43126
- Unit of Infectious Diseases and Hepatology
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
説明
包含基準:
ナイーブ HCV 遺伝子型 1 に感染した慢性患者 (フィブロスキャンの肝臓組織学による F3-F4 線維症段階) は、毎日の臨床診療で利用可能な DAA (関連付けられた PEG-IFN なし) のいずれかで治療されています。
- 非応答者の患者、非応答の特定後に登録および研究された(治療終了後少なくとも12週間) - 50人の患者
- レスポンダー患者、治療前に登録および研究された - 25人の患者
- 18歳以上の男性または女性
- 定量可能な血漿HCV-RNA
- 肝生検またはFibroScan™によって評価されたF3-F4肝線維症(Metavir)
- 最適なDAAスケジュールによる治療(EASLガイドラインに基づく)
- 治療への順守の証拠
除外基準:
- ディープHCVシーケンスによる混合遺伝子型集団
- 最適でない治療スケジュールに従った無反応
- HCCの徴候または症状
- 非代償性肝疾患の病歴
- B型肝炎またはHIVとの同時感染
研究計画
研究はどのように設計されていますか?
デザインの詳細
- 主な目的:他の
- 割り当て:なし
- 介入モデル:単一グループの割り当て
- マスキング:なし(オープンラベル)
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
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他の:慢性HCV感染症の患者
-慢性HCV感染症の患者は、毎日の臨床診療で利用可能なDAA(関連するPEG-IFNなし)のいずれかで治療されます。 介入: 採血。治療を開始する前に、被験者から血液サンプルを採取します。 |
治療を開始する前に、対象から血液サンプルを採取します。
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この研究は何を測定していますか?
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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免疫T細胞応答
時間枠:研究開始から12ヶ月から14ヶ月
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特定のベースライン免疫学的特徴の同定 治療に対する無反応の予測因子
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研究開始から12ヶ月から14ヶ月
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協力者と研究者
協力者
捜査官
- 主任研究者:Carlo Ferrari, Dr、Università degli Studi di Parma
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。
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