Leukina (Sargramostim) na chorobę Parkinsona

Choroba Parkinsona (PD) jest postępującym i prowadzącym do niepełnosprawności zaburzeniem neurologicznym obejmującym nigrostriatum, na które nie jest znane lekarstwo. Dowody sugerują, że stan zapalny ma znaczący udział w przyczynie i/lub postępie choroby. Badania post mortem ludzkiego mózgu, modeli zwierzęcych i ludzkiej krwi obwodowej potwierdzają tezę, że częstotliwość i funkcja poszczególnych krążących podzbiorów limfocytów T są nieprawidłowe i pogarszają się wraz z postępem choroby. Ta nieprawidłowość jest specyficznie związana ze wzrostem liczby efektorowych komórek neurodestrukcyjnych T (Teff) i dysfunkcją regulatorowych komórek T (Treg), które kontrolują Teff. Ta nierównowaga przechyla równowagę homeostatyczną na profil prozapalny z ograniczoną kontrolą. Nie wiadomo jednak, czy takie deficyty limfocytów T są przyczyną choroby Parkinsona, czy też reakcją na nią. Jeśli te deficyty są przyczynowe lub zaostrzające, wówczas skorygowanie deficytu może mieć znaczący pozytywny wpływ na postęp choroby i może złagodzić zwyrodnienie nigrostriatalne lub jego następstwa. Czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów (GM-CSF) jest potencjalnym immunomodulującym lekiem na PD w celu zwiększenia liczby Treg lub funkcji oraz zmniejszenia lub przekształcenia prozapalnych odpowiedzi Teff, co prowadzi do neuroprotekcji nigrostriatum i lepszych wyników klinicznych choroby. Rekombinowany ludzki GM-CSF (sargramostim) jest dostępny jako Leukine®. Celem tego badania jest ustalenie, czy leukina (sargramostim) może być bezpiecznie podawana pacjentom z chorobą Parkinsona przez dłuższy okres czasu (56 dni).

W poprzednim badaniu przeprowadzonym w University of Nebraska Medical Center (UNMC) przy użyciu próbek krwi pełnej, pacjenci z chorobą Parkinsona wykazywali różnice w porównaniu z grupą kontrolną opiekunów, zgodnie z wynikami morfologii krwi (CBC) z rozróżnieniem białych krwinek (WBC), aktywowanym fluorescencją analiza sortowania komórek (FACS) pod kątem markerów komórek T i testy funkcjonalne Treg. Te aberracje immunologiczne korelowały z dysfunkcjami motorycznymi, co określono na podstawie ocen części III skali oceny choroby Parkinsona (UPDRS). W tym badaniu pilotażowym monitorowany będzie wpływ leczenia leukiną na deficyty odporności u pacjentów z chorobą Parkinsona. Analizy komórek odpornościowych pełnej krwi, oceny motoryczne oraz badania fizykalne i analizy krwi pod kątem bezpieczeństwa zostaną przeprowadzone przed, w trakcie i po leczeniu leukiną lub placebo pacjentów z chorobą Parkinsona oraz przy użyciu zdrowych osób kontrolnych podczas zbierania danych wyjściowych przed rozpoczęciem leczenia farmakologicznego. Początkowo zostanie zrekrutowanych 16 pacjentów z PD i 16 osób z grupy kontrolnej. Osoby badane zostaną wybrane z poprzedniego badania. Rejestracja zostanie uzupełniona w razie potrzeby o pacjentów z Neurology Consultants of Nebraska-PC, UNMC Neurological Sciences lub rekrutacja przez American Parkinson's Disease Association. Rejestracja będzie rozłożona w czasie, a w razie potrzeby zostaną zwerbowani dodatkowi uczestnicy, aby zastąpić wycofujących się uczestników, z celem ukończenia badania przez 32 pacjentów, 16 pacjentów z PD i 16 z grupy kontrolnej.

Podczas rejestracji i ponownego powtarzania w dwóch 4-tygodniowych odstępach, pełna krew od pacjentów z PD i kontroli zostanie uzyskana przezskórnie przy użyciu standardowych technik sterylnych. CBC z różnicowaniem WBC, analiza FACS dla markerów limfocytów T i testy funkcjonalne Treg zostaną przeprowadzone i wykorzystane do obliczenia profili odpowiedzi immunologicznej jako punktu odniesienia do porównania po leczeniu farmakologicznym. Analizowane będą składy chemiczne krwi, w tym enzymy wątrobowe, elektrolity, azot mocznikowy we krwi, kreatynina, poziom białka całkowitego, albuminy i bilirubiny, a u pacjentów z PD zostaną ocenione przeciwciała anty-GM-CSF. Pacjenci z PD będą oceniani za pomocą badań fizykalnych i klinicznych, w tym ocen części III UPDRS w celu oceny funkcji motorycznych.

Pacjenci z PD zostaną następnie losowo podzieleni na dwie grupy, placebo (n=8) i leukinę (n=8), a udział w grupie kontrolnej zostanie zakończony. Pacjenci włączeni do badania nie będą mieć żadnych odnotowanych chorób współistniejących, w tym infekcji, chorób zapalnych lub nowotworowych i nie będą przyjmować leków immunostymulujących ani immunosupresyjnych. Pacjenci będą nadal przyjmować leki przepisane do ogólnego leczenia choroby Parkinsona, w tym między innymi dopaminę lub agonistów dopaminy. Nie będzie historii wcześniejszych operacji związanych z leczeniem PD. Pacjenci zostaną przeszkoleni w zakresie samodzielnego wstrzykiwania, a grupa leczona będzie samodzielnie podawać leukinę (6 µg/kg) przez podskórne wstrzykiwanie codziennie przez osiem tygodni. Grupa placebo będzie samodzielnie podawać sól fizjologiczną jako placebo. Co dwa tygodnie po rozpoczęciu leczenia i ponownie 4 tygodnie po zaprzestaniu podawania, wszyscy pacjenci z PD, otrzymujący lek lub placebo, będą oceniani za pomocą badań fizykalnych i klinicznych, w tym oceny UPDRS część III. Co 2 tygodnie podczas leczenia Leukine i ponownie 4 tygodnie po odstawieniu leku, pełna krew od pacjentów z PD będzie pobierana przezskórnie przy użyciu standardowych sterylnych technik. W tygodniach 2, 4 i 8 wyniki CBC z różnicowaniem WBC, analizy FACS dla markerów limfocytów T i testów funkcjonalnych Treg zostaną wykorzystane do obliczenia profili odpowiedzi immunologicznej i porównane z wartościami wyjściowymi. CBC z różnicą WBC, całkowitą liczbą limfocytów T i chemią krwi będą analizowane co 2 tygodnie w celu wykrycia potencjalnej toksyczności, a także 4 tygodnie po zakończeniu leczenia Leukine. Poziomy przeciwciał anty-GM-CSF będą oceniane u pacjentów z PD podczas włączania do badania oraz w odstępach 4 tygodniowych podczas leczenia farmakologicznego i 4 tygodnie po jego zakończeniu. Opcjonalne nagrania wideo zostaną wykonane na początku leczenia, po zakończeniu leczenia lekiem/placebo i podczas obserwacji.

Dodatkowym elementem badania jest rozwój magnetoencefalografii (MEG) jako narzędzia do monitorowania PD. MEG zapewnia nieinwazyjną metodę badania aktywności mózgu. Obecnie nie ma odpowiednich narzędzi oceny do monitorowania progresji choroby lub protokołów leczenia w PD. We wstępnych eksperymentach na pacjentach z PD i ich opiekunach dane MEG wykazały silną synchronizację beta podczas odpoczynku w PD i łagodniejszą desynchronizację beta podczas przygotowania do ruchu w porównaniu z grupą kontrolną dobraną pod względem wieku i płci. W tym badaniu amplituda tej patologicznej synchronizacji/desynchronizacji beta będzie monitorowana w celu oceny poprawy funkcji kory mózgowej pacjentów z chorobą Parkinsona leczonych leukiną. MEG zostanie przeprowadzona u pacjentów z PD iw grupie kontrolnej na początku leczenia farmakologicznego oraz u pacjentów z PD pod koniec okresu leczenia farmakologicznego i 4 tygodnie po odstawieniu leku.

Wśród pierwszych 8 pacjentów włączonych do badania zaobserwowaliśmy nieoczekiwane i statystycznie istotne zmiany w ujednoliconej skali oceny PD część III (UPDRS część III) oceny klinicznej funkcji motorycznych u połowy badanych pacjentów. Ten test jest jednak postrzegany jako subiektywny. Aby uzyskać bardziej obiektywną i analityczną ocenę funkcji motorycznych, u pozostałych ośmiu pacjentów z chorobą Parkinsona otrzymujących leukinę lub placebo zostaną przeprowadzone oceny biomechaniczne mobilności, równowagi posturalnej, kontroli motorycznej kończyn górnych i drżenia w stanie spoczynku. Oceny te będą miały miejsce na początku badania, między 7 a 8 tygodniem leczenia farmakologicznego oraz 4-5 tygodni po zaprzestaniu leczenia farmakologicznego. Testy funkcji motorycznych mają na celu dostarczenie obiektywnej, wygenerowanej komputerowo oceny, mierzonej na podstawie wydajności pacjenta w każdym teście. Aby zbadać możliwy mechanizm zmian funkcji motorycznych obserwowanych w ciągu dwóch tygodni terapii, zostaną przeprowadzone badania neuroprzekaźników osocza/surowicy, w tym glutaminianu, glutaminy, serotoniny, acetylocholiny, kwasu gamma-aminomasłowego (GABA), norepinefryny i epinefryny. Pomiary te zostaną przeprowadzone na ostatniej kohorcie pacjentów z PD w badaniu przed rozpoczęciem leczenia, 8 tygodni po rozpoczęciu leczenia i 4 tygodnie po zaprzestaniu leczenia farmakologicznego. Testy zostaną ocenione za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) lub ultrasprawnej chromatografii cieczowej (UPLC). Decyzja o tym, który test zostanie przeprowadzony dla którego neuroprzekaźnika będzie oparta na pomiarach czułości i krzywej standardowej. Określone zostaną zależności między poziomami neuroprzekaźników a funkcjami motorycznymi. Testy te są uzupełnieniem bieżących i zatwierdzonych testów laboratoryjnych. Wymagania kwalifikacyjne pozostają niezmienione w stosunku do obecnie obowiązujących. Pomiary funkcji motorycznych i stężenia neuroprzekaźników w surowicy/osoczu zostaną również zakończone 4-5 tygodni po zaprzestaniu leczenia. Pomysł zbadania neuroprzekaźników w tym badaniu opiera się na roli w funkcjach motorycznych, które obejmują zmęczenie, jelita, dysfunkcje seksualne i zmiany nastroju, które obserwuje się również w PD, jak również wykazano, że GM-CSF wpływa na poziomy neuroprzekaźników (96). Ten zakres wymienionych neuroprzekaźników nie był badany w pierwszej części tego badania i będzie wymagał ograniczonych dodatkowych zasobów krwi i testów w ostatniej części badania.