Nieinwazyjna diagnostyka małych guzów nerek (NISar)

Badanie 1:

Cel próby:

Identyfikacja biomarkerów we krwi i moczu oraz stworzenie podstaw dla małoinwazyjnego programu diagnostycznego dla SRM.

Metoda:

Kolekcja próbek:

Wszystkie próbki krwi zostaną pobrane do probówek zawierających tetraoctan etylenodiaminy (EDTA). następnie dwie próbki odwirowuje się przy 2000 G przez 10 minut w celu wyizolowania osocza, które następnie przechowuje się w temperaturze -80oC. Pozostałe 2 próbki przechowuje się w temperaturze -80oC bez zmian. Całkowity kwas nukleinowy (TNA) zostanie wyekstrahowany ze stężonych próbek moczu i osocza, jak opisano wcześniej, przy użyciu instrumentu NucliSENS easy MAG. Wyekstrahowany TNA zostanie następnie wykorzystany do ukierunkowanego profilowania immunologicznego i onkologicznego (mutacje i ekspresja) przy użyciu sekwencjonowania RNA i DNA opartego na sekwencjonowaniu nowej generacji (NGS).

Dodatkowa próbka rdzenia z guza nerki będzie przechowywana bez konserwantów do analizy sekwencji DNA i RNA opartej na NGS.

Badanie 2:

Cel próby:

Identyfikacja zmian krążących biomarkerów po leczeniu radykalnym u chorych na raka nerki potwierdzonego biopsją.

Metody:

Rekrutacja pacjentów:

Pacjenci zostaną włączeni do badania 2 w taki sam sposób jak do badania 1.

Kolekcja próbek:

Oprócz pierwszych czterech próbek od każdego pacjenta zostaną pobrane cztery dodatkowe próbki krwi (20 ml) 1 miesiąc i 6 miesięcy po leczeniu. Wszystkie próbki zostaną zakodowane i otrzymają identyfikator zgodnie z numerem CPR pacjenta przy użyciu informatycznego systemu kodowania RedCap.

Przechowywanie, przygotowanie i analiza próbek:

Z próbkami krwi i moczu należy postępować w taki sam sposób, jak w badaniu 1. Analiza statystyczna dla badania 1 i 2:

Analiza eksploracyjna danych zostanie przeprowadzona na poziomach ekspresji molekularnej określonych zidentyfikowanych sekwencji, zostanie dopasowane nienadzorowane hierarchiczne grupowanie i zostaną utworzone mapy cieplne. Właściwości zgrupowanych elementów zostaną następnie dopasowane do wyników histopatologicznych w celu wyszukania histologicznych wzorców agregacji.

Poziomy ekspresji zidentyfikowanych sekwencji we krwi iw moczu zostaną porównane za pomocą testu U Whitneya i testu Kruskala-Wallisa. Zmiany w poziomach ekspresji od przedoperacyjnego do pooperacyjnego zostaną ocenione za pomocą ANOVA Friedmana i późniejszego porównania parami post-hoc z testem rang podpisanych Wilcoxona z poprawką Bonferroniego.

Analiza krzywej charakterystyki działania odbiornika zostanie przeprowadzona na próbkach przedoperacyjnych, aby przetestować ważność testów dla każdego markera w celu odróżnienia łagodnej histologii od złośliwości, z wartością odcięcia dla pola pod krzywą (AUC) wynoszącą 0,75.

Wielkość próby Minimalna wielkość próby wymagana do uzyskania mocy statystycznej 80% z poziomem istotności 0,05 i oczekiwanym odsetkiem rezygnacji wynoszącym 15% wyniesie 155 pacjentów.

Obliczenia wielkości próbki zostały obliczone za pomocą oprogramowania GPower (Düsseldorf, DE).

Badanie 3:

Cel próby:

Zbadanie wartości diagnostycznej mpMRI w określaniu złośliwości w SRM.

Metoda:

Rekrutacja pacjentów:

Po wyrażeniu pisemnej zgody mpMRI zostanie zaplanowane tego samego dnia, ale przed biopsją pierwotną. Wszystkie mpMRI zostaną wykonane lokalnie, a zdjęcia przesłane do Szpitala Uniwersyteckiego w Odense, gdzie specjalista radiolog zbada skany w sposób ślepy, co oznacza, że ​​nie będzie znał diagnozy patologa. Wynik zostanie zapisany w zakodowanej bazie danych RedCAP.

MpMRI są wykonywane zgodnie ze standardowym protokołem i obejmują następujące sekwencje: T1 (ze zmniejszonym powinowactwem do tkanki tłuszczowej) +/- kontrast, sekwencje ważone dyfuzją i wypłukiwanie/wymywanie.