Estudo de segurança e determinação de dose de NS-065/NCNP-01 em meninos com distrofia muscular de Duchenne (DMD)

Experimental: NS-065/NCNP-01 40mg/kg

Seis pacientes com DMD confirmada com deleções genéticas passíveis de pular o exon 53 receberão uma infusão intravenosa de NS-065/NCNP-01 na dose de 40 mg/kg uma vez por semana durante 24 semanas

Medicamento: NS-065/NCNP-01

Experimental: NS-065/NCNP-01 80mg/kg

Seis pacientes com DMD confirmada com deleções genéticas passíveis de salto do exon 53 receberão uma infusão intravenosa de NS-065/NCNP-01 80mg/kg uma vez por semana durante 24 semanas

Medicamento: NS-065/NCNP-01

Comparador de Placebo: Placebo

Dois pacientes em cada um dos grupos de dose receberão placebo como uma infusão intravenosa uma vez por semana durante 4 semanas, seguido por 20 semanas de tratamento aberto

Medicamento: Placebo

Incidência de eventos adversos avaliada pela CTCAE v4.0.

Os eventos adversos emergentes do tratamento (TEAEs) foram resumidos para o Período 1 comparando a dose baixa com a dose alta com o placebo e para o Período 2 entre a coorte de dose baixa e a coorte de dose alta. Os TEAEs foram resumidos tanto no nível do paciente quanto ao número de TEAEs, maior gravidade, relação, ação e resultado e no nível TEAE (resumindo eventos) por sistema de órgãos e termo preferencial TEAE, bem como gravidade, relação, ação e resultado.

Foi utilizado o Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA) versão 20.1 e a classificação do Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE).

Produção de distrofina por Western Blot

A produção percentual normal de distrofina em biópsias musculares dos participantes do estudo no início e após 24 semanas de tratamento foi medida por Western blot.

Para analisar a indução da distrofina, foram feitas biópsias de um músculo bíceps no início e do outro músculo bíceps após 24 semanas de tratamento. Amostras de músculo foram congeladas e entregues a um laboratório central. Todos os pesquisadores de laboratório permaneceram cegos para a identidade da amostra. Os níveis de proteína distrofina foram avaliados usando curvas padrão em cada gel (intervalo de 0-25% dos níveis normais) geradas pela mistura de 5 amostras de controle normais com uma amostra de DMD.

Produção de distrofina por RT-PCR para mRNA - Porcentagem de éxons ignorados - Molaridade

A alteração do splicing do mRNA foi medida por RT-PCR dos transcritos do mRNA da distrofina de uma biópsia muscular do paciente no início e após 24 semanas de tratamento.

Para analisar a indução da distrofina, foram feitas biópsias de um músculo bíceps no início e do outro músculo bíceps após 24 semanas de tratamento. Amostras de músculo foram congeladas e entregues a um laboratório central. Todos os pesquisadores de laboratório permaneceram cegos para a identidade da amostra. Para RT-PCR, bandas correspondentes a versões específicas do mRNA da distrofina spliced ​​foram visualizadas por eletroforese em gel, e as quantidades de diferentes isoformas de mRNA foram comparadas.

Produção de distrofina por espectrometria de massa

A produção de proteína distrofina foi medida por métodos de espectrometria de massa de isótopos estáveis ​​a partir de uma biópsia muscular do paciente no início e após 24 semanas de tratamento.

Para analisar a indução da distrofina, foram feitas biópsias de um músculo bíceps no início e do outro músculo bíceps após 24 semanas de tratamento. Amostras de músculo foram congeladas e entregues a um laboratório central. Todos os pesquisadores de laboratório permaneceram cegos para a identidade da amostra.

Os peptídeos da distrofina foram identificados e quantificados usando cromatografia líquida de alta eficiência de nanofluxo de fase reversa com espectrometria de massa de alta resolução.

Produção de distrofina por imunofluorescência

A produção de proteína distrofina foi medida por métodos de coloração de imunofluorescência de uma biópsia muscular do paciente no início e após 24 semanas de tratamento.

Para analisar a indução da distrofina, foram feitas biópsias de um músculo bíceps no início e do outro músculo bíceps após 24 semanas de tratamento. Amostras de músculo foram congeladas e entregues a um laboratório central. Todos os pesquisadores de laboratório permaneceram cegos para a identidade da amostra.

A coloração de imunofluorescência para distrofina foi realizada em seções seriadas de biópsia muscular em duplicata.

Mudança da linha de base na força muscular medida pelo teste muscular quantitativo (QMT).

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado à visita pré-infusão: teste muscular quantitativo (QMT).

Mudança da linha de base na distância percorrida no teste de caminhada de seis minutos (6MWT).

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado à Visita Pré-Infusão: Teste de Caminhada de Seis Minutos (6MWT).

Mudança da linha de base no tempo para subir 4 degraus (TTCLIMB).

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado com a Visita Pré-Infusão: Tempo para Subir 4 Escadas (TTCLIMB).

Mudança da linha de base no tempo para subir 4 degraus (TTCLIMB) Velocidade

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado à visita pré-infusão: tempo para correr/caminhar 10 metros (TTRW). Os resultados foram convertidos em velocidade (metro/tempo).

Mude da linha de base no tempo para correr/caminhar 10 metros (TTRW).

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado à visita pré-infusão: tempo para correr/caminhar 10 metros (TTRW).

Mude da linha de base no tempo para a velocidade de corrida/caminhada de 10 metros (TTRW).

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado à visita pré-infusão: tempo para correr/caminhar 10 metros (TTRW). Os resultados foram convertidos em velocidade (metro/tempo).

Mudança da linha de base no tempo para ficar em pé (TTSTAND)

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado com a visita pré-infusão: tempo para levantar (TTSTAND)

Mudança da linha de base no tempo para a velocidade de repouso (TTSTAND)

Um endpoint secundário de eficácia foi comparado com a visita pré-infusão: tempo para levantar (TTSTAND). Os resultados foram convertidos em velocidade (elevação/tempo).

Alteração da linha de base na pontuação da North Star Ambulatory Assessment (NSAA).

A NSAA é uma escala funcional desenvolvida para uso em crianças ambulantes com distrofia muscular de Duchenne (DMD). É composto por 17 atividades graduadas em 0 (incapaz de realizar), 1 (realiza com modificações), 2 (movimento normal). Ele avalia as habilidades necessárias para permanecer ambulante que se deterioram progressivamente em pacientes com DMD não tratados, bem como em outras distrofias musculares, como a distrofia muscular de Becker. A pontuação total da NSAA varia de 0 a 34, com uma pontuação de 34 indicando função normal.