Papel preditivo de novos biomarcadores para pacientes hipersensíveis à radiação no câncer de mama (biorise) (BIORISE)

Os mecanismos moleculares envolvidos nas respostas induzidos pela radiação são complexos, e abordagens proteômicas podem ser usadas para entender melhor o processo geral de reação de radiação ionizante e identificar possíveis marcadores preditivos sensíveis à rádio. Até agora, poucas publicações abordaram a determinação de pacientes radiossensíveis.

Com base em nossos resultados anteriores e para melhorar o valor preditivo positivo do ensaio de efeito tardio induzido por radiação, desenvolvemos uma abordagem proteômica quantitativa para identificar marcadores radiobiológicos preditivos em pacientes com toxicidade grave. Primeiro, quatro pacientes foram selecionados com um baixo valor de RILA dos estudos prospectivos mencionados acima. Dois pacientes não tiveram toxicidade pelo menos quatro anos após o final do tratamento, enquanto outros dois pacientes desenvolveram uma toxicidade grave maior que o grau 2. Os linfócitos T foram isolados do sangue total e metade deles foi irradiada in vitro. Em seguida, ele executou um fluxo de trabalho proteômica quantitativo usando uma marcação de ITRAQ de 8 plex e após vários fracionamentos para otimizar a resolução da análise (fracionamento fora do gel seguido de cromatografia nanoliquídeo), as proteínas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem (4800 mais MALDI TOF/TOF). Mais de 1300 proteínas totais foram identificadas com alta confiança (95%, um peptídeo único). A 0 Gy, 135 proteínas foram expressas diferencialmente entre pacientes com ou sem toxicidade grave induzida por rádio. Nos linfócitos T irradiados (8 Gy), 107 proteínas foram expressas diferencialmente entre pacientes com ou sem toxicidade grave induzida por rádio. Entre elas, cinco proteínas (Ak2, adenilato quinase 2; IDH2, isocitrato desidrogenase 2 (NADP+); ANX1, anexina 1; Apex1, DNA- (Apurinic ou Apirimidinic Site) Lyase e a expressão de hsc70, citada de timer) com a expressão mais alta da proteína mais alta e a expressão mais alta da proteína, e a expressão mais alta) da proteína mais alta) e da expressão mais alta da lyase. Os controles foram selecionados para validação consecutiva. Essas proteínas estão envolvidas em vários mecanismos, incluindo metabolismo e produção de energia, apoptose, proteína de ligação ao cálcio e reparo de danos ao DNA. Atualmente, essas cinco proteínas são objeto de aplicação de patentes.

Em seguida, 10 outros pacientes serão recrutados (5 pacientes com fibrose mamária de grau ≥ 2 e 5 pacientes sem toxicidade) que apresentaram um baixo valor de RILA para validar a expressão de proteínas por seleção ocidental. Os resultados mostraram que todas as proteínas foram superexpressas em pacientes com linfócitos T irradiados com toxicidade grave comparativamente aos pacientes sem toxicidade.

No entanto, para confirmar o nível de expressão de proteínas em pacientes com efeitos tardios induzidos por radiação e determinar o valor do desempenho, em particular o valor preditivo positivo, de um exame de sangue com base na dosagem de um painel de cinco proteínas, é necessário validar esses resultados preliminares por um estudo prospectivo sobre uma grande coorte de pacientes