Prädiktive Rolle neuer Biomarker für überempfindliche Patienten mit Strahlung bei Brustkrebs (Biorise) (BIORISE)

Molekulare Mechanismen, die an strahlungsinduzierten Reaktionen beteiligt sind, sind komplex, und proteomische Ansätze können verwendet werden, um den Gesamtreaktionsprozess der ionisierenden Strahlung besser zu verstehen und potenzielle radiosensitive Vorhersagemarker zu identifizieren. Bisher haben nur wenige Veröffentlichungen die Bestimmung von strahlenempfindlichen Patienten angesprochen.

Basierend auf unseren früheren Ergebnissen und zur Verbesserung des positiven Vorhersagewerts des Strahlungs -induzierten Spätwirkungs -Assays entwickelten wir einen quantitativen proteomischen Ansatz, um prädiktive radiobiologische Marker bei Patienten mit schwerer Toxizität zu identifizieren. Zunächst wurden vier Patienten aus den oben genannten prospektiven Studien mit einem niedrigen RILA -Wert ausgewählt. Zwei Patienten hatten mindestens vier Jahre nach dem Ende der Behandlung keine Toxizität, während zwei weitere Patienten eine schwere Toxizität von mehr als Grad 2 entwickelten. T-Lymphozyten wurden aus Vollblut isoliert, und die Hälfte von ihnen wurde in vitro bestrahlt. Anschließend führte es einen quantitativen Proteomik-Workflow unter Verwendung einer 8-Plex-ITRAQ-Markierung und nach mehreren Fraktionationen zur Optimierung der Auflösung der Analyse (Off-Gelfraktionierung gefolgt von Nanoliquidchromatographie) durch. Die Proteine ​​wurden durch Tandem-Massenspektrometrie (4800 plus Maledi TOF/TOF/TOF/TOF) identifiziert. Mehr als 1300 Proteine ​​wurden mit hohem Vertrauen (95%, ein einzigartiges Peptid) identifiziert. Bei 0 Gy wurden 135 Proteine ​​zwischen Patienten mit oder ohne schwere Radio-induzierte Toxizität unterschiedlich exprimiert. In bestrahlten T-Lymphozyten (8 Gy) wurden 107 Proteine ​​zwischen Patienten mit oder ohne schwere radioinduzierte Toxizität unterschiedlich exprimiert. Unter ihnen sind fünf Proteine ​​(AK2, Adenylatkinase 2; IDH2, Isocitratdehydrogenase 2 (NADP+); Anhang, Annexin 1; Apex1, DNA- (Apurin- oder Apyrimidin) Lyase und HSC70, Hitzeschock, die 71 kDA-Verhältnisse mit hoher Protex-Ausdrücke (> 1.5) und die Verhältnis von Hitzeschock cognierten. GY -Kontrollen wurden zur aufeinanderfolgenden Validierung ausgewählt. Diese Proteine ​​sind an mehreren Mechanismen beteiligt, einschließlich Stoffwechsel- und Energieproduktion, Apoptose, Calciumbindungsprotein und DNA -Schadensreparatur. Diese fünf Proteine ​​sind derzeit Gegenstand einer Patentanwendung.

Anschließend werden 10 andere Patienten rekrutiert (5 Patienten mit Brustfibrose von Grad ≥ 2 und 5 Patienten ohne Toxizität), die einen niedrigen RILA-Wert zur Validierung der Proteineexpression durch Western-Blot aufwiesen. Die Ergebnisse zeigten, dass alle Proteine ​​bei bestrahlten T-Lymphozyten-Patienten mit schwerer Toxizität im Vergleich zu Patienten ohne Toxizität überexprimiert wurden.

Um das Proteinexpressionsniveau bei strahlungsbedingten Patienten mit verspäteten Effekten zu bestätigen und den Leistungswert, insbesondere den positiven Vorhersagewert, eines Blutuntersuchs zu bestimmen, basierend auf der Dosierung eines Gremiums von fünf Proteinen