伴或不伴支气管哮喘的鼻息肉患者对美泊利单抗治疗反应的生物标志物 (CALIOPI)

假设 慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉伴或不伴支气管哮喘患者的美泊利单抗治疗应答者和非应答者的病理和临床特征在长期基础上关于气道重塑、炎症细胞和其他生物标志物的鉴定。

目标/终点

本研究的主要目标是：

1. 在治疗开始前和美泊利单抗治疗 156 周后评估气道不同解剖位置（鼻、支气管）的气道重塑。
2. 鉴定对美泊利单抗治疗有反应和无反应的不同位置（鼻、咽、支气管）微生物组的任何特征。

本研究的主要次要目标是：

1. 在美泊利单抗治疗 152 周后，结合组织和分泌物样本中气道中不同解剖位置的选定炎症生物标志物，以鉴定对美泊利单抗的无反应者和反应者。

2. 通过在治疗 52 周后减少需要手术的患者，同时考虑气道重塑、炎症细胞和炎症生物标志物以及临床特征，证明美泊利单抗治疗伴或不伴支气管哮喘的鼻息肉患者的效果。

   其他目标/终点 鼻息肉伴或不伴支气管哮喘患者在美泊利单抗治疗期间哮喘控制和患者生活质量（包括睡眠质量）呼吸参数的任何改善。

   在治疗 52 周和治疗 156 周后，将鼻息肉和支气管哮喘视为统一气道疾病的任何可能的反应生物标志物。

   患者对 156 周美泊利单抗剂量依从性的表征。

   研究设计和方法 一项 IV 期研究，其中患者将从支气管哮喘和耳鼻喉科门诊诊所收集，每个地点覆盖希腊人口。 由于有关 Covid-19 大流行的未知情况，我们假设这项临床研究不会干扰我们诊所的工作量。

   总的来说，这是一项前瞻性多中心研究，包括 7 个诊所。 该研究将包括长达 2 周的筛选期以评估资格并获得书面知情同意书和 156 周的美泊利单抗治疗期。

   抽样方法、受试者数量和时间表研究人群研究人群将包括大约 57 名患有鼻息肉病伴或不伴支气管哮喘的患者，他们接受美泊利单抗治疗 3 年，年龄在 18 岁及以上（无儿童）。 将根据欧洲关于鼻窦炎和鼻息肉的立场文件对伴有或不伴有哮喘的鼻息肉病患者进行临床评估。 此外，除美泊利单抗外，我们患者的标准护理可能包括 ICS、抗组胺药或 LTRA。

   目标登记我们的目标样本量是根据 57 名患者为最小样本量计算的，根据 g 功率分析计算网状基底膜厚度（如样本量计算段落中所述）。 我们额外增加了 5%，以确保在我们的前瞻性研究期间可能出现患者退出的情况下结果的有效性。

   研究参与、评估和跟进：

   生命体征将在筛选访问、基线和每 3 个月的实地访问中进行。 测量将包括收缩压和舒张压、脉率和体温。

   将在筛选访问时测量以厘米 (cm) 为单位的身高和以千克 (kg) 为单位的体重。 体重指数 (BMI) 将计算为体重（千克）除以身高（米）的平方

   实验室评估（血液学、血液化学、尿液分析）包括在基线收集静脉血和尿液。 收集女性受试者的尿液也将评估怀孕情况。 IgE 水平将在筛选访问时使用 immunoCAP 测试进行评估，并将报告为 IU/mL。

   调查问卷 将进行以下调查： 1) 哮喘控制调查问卷 (ACQ-5) 和哮喘控制测试 (ACT) 以评估当前的哮喘控制情况； 2）哮喘生活质量问卷（AQLQ+12）评估生活质量和心理发病率。 进一步评估睡眠质量 1) 雅典失眠量表 (AIS)、2) Epworth 嗜睡量表 (ESS)、3) 圣乔治呼吸问卷 (SGRQ) 和 4) WHO（五）幸福指数 (WHO-5)， 5) 疲劳严重程度量表 (FSS)，6) 视觉模拟量表 (VAS) 评分，7) SinoNasal 结果测试 (SNOT-22) 评分，8) 宾夕法尼亚大学气味识别测试 (UPSIT) 评分。

   FeNO 根据美国胸科学会指南并按照制造商的规定，将在基线和每 6 个月测量一次呼出的一氧化氮 (NO)。 FeNO 水平将以十亿分之一的形式报告。 将在进行肺活量测定之前进行测量。

   血液嗜酸性粒细胞水平 将在上午 8 点至 10 点之间、在基线时和在美泊利单抗治疗的 156 周期间每 3 个月采集一次静脉血样。 绝对血液嗜酸性粒细胞计数将报告为细胞/μl。

   如表 1 中所指定，将在访问时（基线和每 3 个月）使用研究中心自己的设备进行肺活量测定。 所有门诊就诊必须在早上进行。 在治疗期间，肺活量计将符合当前的 ATS/ERS 指南，并且肺活量计必须生成所有生成数据的打印输出，这些数据应存储在受试者的笔记中。 肺活量计将根据制造商的说明进行校准。 必须在访问 0 肺活量测定的同时（±1 小时）进行肺活量测定。 如果可能，受试者应在就诊前尽量停用短效 β2 激动剂 (SABA) ≥ 4 小时，停用 LABA ≥ 15 小时 (GINA 2019)。 要记录的评估将包括 FEV1、FVC、FEV1/FVC%、PEF 和 FEF25-75。 每次就诊时将使用 200-400mcg 沙丁胺醇或等效物进行支气管扩张剂后测量。

   脉冲振荡法 脉冲振荡法 (IOS) 将在基线、治疗 52 周后和治疗 156 周后进行。

   Lund Mackay 评分 Lund-Mackay 计算机断层扫描 (CT) 评分将在基线、治疗 52 周和 156 周后通过表 1 中指定的 CT 窦进行评估。术前和随访 CT 窦作为标准用于 CRS 患者的临床实践赞助商国家的护理（辐射剂量约 50mGy）。 Lund-Mackay CT 分期将由 2 名不同的临床医生进行盲法评估。

   峰值鼻吸气流量 (PNIF) PNIF 将在基线和每 6 个月应用一次，直到治疗 156 周。 PNIF 将使用 Olympus ENF 型 P4 纤维镜和 Clement Clark International Limited 型号的 IN-CHECK ORAL ATM 设备进行评估。

   前鼻测压法 前鼻测压法将在基线时和每 6 个月进行一次，直到使用鼻测压系统 PDD-301/sr 治疗 156 周。

   生物制剂治疗 完成筛选访视后，参与者可以在一个月内开始生物制剂治疗（美泊利单抗）。 在治疗期间，受试者将由将他们转介到研究小组以参与研究的肺科医生照顾。 这些肺科医生将被称为“助理肺科医生”。 将按照产品制造商的说明提供治疗。

   在研究期间提供生物治疗的助理肺科医生和耳鼻科医生将需要签署协议以按照方案进行研究，承认他/她对医疗行为和研究行为负责，并确保助理（和他们的同事和雇员）协助进行研究的人被告知他们的义务。

   机制将到位，以确保助理工作人员在整个研究过程中获得研究小组的适当信息和支持。

   生物治疗期间的跟进：在生物治疗开始和每次就诊时收集信息（见表 1）将由副肺科医生执行，如果副肺科医生要求，研究小组将提供支持，例如，研究人员通过电话或面对面接触将采访患者。 此外，将根据患者的口头确认从医生那里记录依从性。 将在每次访视时记录药物给药的日期形式，以及即时和延迟的不良反应。

   安全监测 记录的不良事件 (AE) 将根据研究报告的要求进行监测和整理。

   不良事件 不良事件是指在开始研究后出现或恶化的任何不良体征、症状或医疗状况。 开始研究药物前出现的医疗状况/疾病只有在开始研究药物后恶化时才被视为不良事件。 只有在引起临床体征或症状、被认为具有临床意义或需要治疗时，异常的实验室值或测试结果才构成不良事件。 此外，还包括与 Covid-19 相关的不良事件。 如果伙伴肺科医生或研究人员发现与产品相关的 AE，可以根据当地自发 AE 报告的标准做法向制造商报告。 报告的副本也应发送给研究协调员。 严重不良事件 (SAE) 将在 eCRF 页面中报告，并且在 24 小时内所有调查人员将有责任通知塞萨洛尼基的中央委员会。 然后中央委员会将通知科学委员会和希腊医疗机构。 此外，每个中心的主要研究者将与中央委员会一起进行医学和科学判断，以决定受试者是否应停止治疗。

   独立数据监测委员会/数据和安全监测委员会（IDMC/DSMB）是塞萨洛尼基（中央委员会）的中央研究人员。 为成功监控协议评估，IDMC/DSMB 将安排每个月给所有包含的站点打电话。

   Konstantinos Porpodis - 首席研究员（塞萨洛尼基亚里士多德大学肺部副教授，塞萨洛尼基乔治帕帕尼古拉乌医院），Kalliopi Domvri - 临床研究助理 - 研究经理 - 副研究员，组织学 - 胚胎学实验室，塞萨洛尼基亚里士多德大学医学院.

   妊娠报告 最初，接受筛查的女性患者必须进行妊娠试验。 在治疗期间，如果女性受试者向我们报告怀孕，她将被要求退出研究（以防止偏倚）然后，她将被询问是否愿意继续接受本方案之外的治疗并在每个中心的门诊部。

   预筛选和筛选失败受试者将在签署同意书时分配一个研究编号。 签署但未进行筛选访问评估的受试者将被视为预筛选失败。 这些主题的数据库中不会捕获任何数据。

   完成两次筛选访问中至少一次但未开始生物治疗的受试者将被指定为筛选失败。

   预筛选和筛选失败需要收集的信息将在数据库完成中详细说明。

   退出访视 如果参与者决定在随访期间退出研究（除了失访以外的任何原因），他们可能会被要求参加退出访视（如果研究者认为有必要并征得同意）。 在访问期间，作为临床信息收集的一部分，可能会询问参与者有关他们当前状况的问题，例如：哮喘和鼻部症状、恶化和正在接受的治疗的进展。

   血样的采集和处理 将在基线访视、6 个月和治疗完成后采集血样。

   诱导痰 根据 ERS ​​工作组报告，诱导痰将在治疗开始前的基线和治疗 52 周和 156 周后进行，其中建议对诱导痰处理提出基于专家共识的详细建议。 收集诱导痰后，将样品的上清液保存在-20°C eppendorf 管中，直至分析完成。

   支气管镜检查、支气管/鼻活检和清洗样本的收集和处理 内窥镜检查和支气管活检、支气管清洗样本将在患者书面同意后进行。 具体而言，将包括一份单独的知情同意书，由每位患者签署。 将在三个时间点（治疗开始前的基线、治疗 52 周后和治疗 156 周后）进行支气管镜检查。 按照美国胸科学会和英国胸科学会的建议，在监测麻醉护理下进行可弯曲支气管镜检查和诊断技术。

   经患者书面同意，将在基线访视、治疗 52 周和 156 周后进行鼻活检。 内窥镜外科手术将使用鼻剪通过切割组织然后取出样本来进行。 该方法将作为功能性内窥镜鼻窦手术 (FESS) 进行，这是一种直接可视化的微创技术。 内窥镜手术需要局部麻醉。 在检查过程中将识别和评估的具体特征是中鼻甲和中鼻道（骨鼻道复合体）、解剖性阻塞、粘液和鼻息肉。

   在内窥镜手术后，组织样本将使用甲醛或戊二醛膨胀或浸泡固定，并包埋在石蜡中。 气道将在病理学家的判断下在诊断解剖期间系统地取样或获得。 气道重塑将不仅通过光学显微镜而且通过电子显微镜进行评估。

   最后，支气管清洗液样本会被立即运送到实验室，在-80度下保存。 支气管冲洗液的检查将在稍后阶段进行，以通过 RT-PCR、ELISA 和流式细胞术确定几种生物标志物，如下一段所述。

   为了评估组织、血液和其他生物体液中炎症的生物标志物，将使用珠子或 ELIZA 方法进行流式细胞术分析 (FACS)。 将通过 FACS 分析免疫表型。 将通过 RT-PCR 评估生物标志物的表达。 生物标志物将在美泊利单抗治疗开始前、1 年后和 156 周后进行评估。

   微生物组分析 将在基线时和治疗 52 周后采集微生物组样本。 将使用 BioRad iCycler iQ 热循环仪系统（BioRad，Hercules，CA）通过 qPCR 对总细菌、特定分类群和丁酸盐生产能力进行量化。

   过敏测试（如果适用） 在筛选访问时，将评估患者的特应性状态（如果不可用），通过皮肤点刺试验 (SPT) 对空气过敏原的标准面板进行检测，以检测针对各种常见吸入性过敏原的总 IgE 抗体。

   样本量计算 G 功效分析 使用 G*Power 软件（Die Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf，德国）计算样本量。 用于研究伴有或不伴有支气管哮喘的慢性鼻窦炎鼻息肉患者气道重塑的美泊利单抗治疗前后网状基底膜厚度的差异是我们的主要终点之一。 在 Diver 等人的研究中，据报道，tezepelumab 治疗前后的网状基底膜厚度分别为 3.86 ± 1.54 和 3.35 ± 1.34。 使用此数据和双侧检验，功效为 0.95，统计显着性水平为 0.05，我们计算出的效应量为 0.49，表明总样本量为 57 名参与者。

   Sarah Diver、Latifa Khalfaoui、Claire Emson、Sally E Wenzel、Andrew Menzies-Gow、Michael E Wechsler、James Johnston、Nestor Molfino、Jane R Parnes、Ayman Megally、Gene Colice、Christopher E Brightling，CASCADE 研究调查员。 tezepelumab 对中度至重度不受控制的哮喘患者气道炎症细胞、重塑和高反应性的影响 (CASCADE)：一项双盲、随机、安慰剂对照的 2 期试验。 柳叶刀呼吸医学。 2021 年 11 月；9(11)：1299-1312。

   统计计划分析将使用 SPSS（21.0 版 IBM SPSS 统计软件，美国纽约州阿蒙克）进行统计分析。 分类变量将表示为数字 (n) 和百分比 (%)，如果正态分布，则连续变量表示为平均值 ± SD，否则表示为中位数和四分位数范围。 必要时，不符合正态分布的变量将被转换。 P < 0.05 被认为具有统计学意义。 将执行 Shapiro-Wilk 检验以将参数变量与非参数变量分开。 参数配对样本 T 检验或非参数变量 Wilcoxon 符号秩检验将用于检测伴有或不伴有哮喘的 CRS 鼻息肉患者美泊利单抗治疗前后组织病理学、血液或临床参数测量变量的差异.

   没有比较组，因为每个患者都可以控制自己。 有一些基线特征（临床和实验室生物标志物）将在基线、每 6 个月、治疗完成 52 周和 156 周后进行测量。 主要终点是鼻子和支气管气道重塑的变化。

   研究终点还包括对所有这些生物标志物的分析，以确定无反应者和超级反应者的特征。 此外，次要终点包括对方法中提到的生物标志物的评估作为评估。 最初将对完成 52 周和 156 周治疗期的患者人数进行统计分析。 其次，将未完成治疗的患者分别进行分析，最后将这两组患者进行比较。

   气道重塑和对治疗的总体反应以及在一年和三年内（从基线到治疗开始后 1 年）的每个结果将通过每个患者的依赖样本的配对测试（参数和非参数配对测试）来测量。 然后将对治疗的反应定义为一年和三年内结果的变化（绝对变化和百分比变化）。 我们将通过对每个临床病理结果使用多元回归模型来评估影响治疗（变化）反应的预测因素，例如生物标志物。 对于在研究期间每个受试者有超过 2 个观察结果的结果，我们将使用混合模型，使用结果的重复测量。 所有测试都是双侧的，统计显着性水平为 5%。

   数据库

   资料收集方法：

   电子数据收集平台将是每 3 个月在基线时使用的方法，直到对该数据库进行 1 年跟进。 在治疗访问期间，纸质表格/问卷将由副肺科医生/耳鼻喉科医生完成。 每个站点都将在电子数据库中输入特定数据。 每个患者都由一个主题编号唯一标识，该编号由负责监测站点分配的站点编号和研究者分配的序列号组成。 在签署知情同意书后，研究者会为患者分配下一个序号。 该站点必须联系中央研究人员并提供所要求的患者身份信息，这些信息已注册到电子数据库中。 治疗访视表也将发送给中央研究人员。 授权的研究人员将负责数据收集、编辑，并保护在他们自己的站点收集的数据，并每天备份数据库。 质量审查/控制将是所有相关人员和中央研究人员[数据保管人]的共同责任。