Биомаркеры ответа на лечение меполизумабом у пациентов с назальными полипами с бронхиальной астмой или без нее (CALIOPI)

Гипотеза Идентификация патологических и клинических характеристик респондеров и нереспондеров на лечение меполизумабом у пациентов с хроническим риносинуситом с полипами носа с бронхиальной астмой или без нее в отношении ремоделирования дыхательных путей, воспалительных клеток и других биомаркеров на долгосрочной основе.

Цели/Конечные точки

Основными задачами этого исследования являются:

1. Оценка ремоделирования дыхательных путей в различных анатомических местах дыхательных путей (нос, бронхи) в исходном состоянии, до начала лечения и через 156 недель лечения меполизумабом.
2. Выявление любых характеристик микробиома различной локализации (носа, глотки, бронхов) у ответивших и не ответивших на лечение меполизумабом.

Ключевыми вторичными целями этого исследования являются:

1. Комбинация выбранных воспалительных биомаркеров различных анатомических локализаций в дыхательных путях в образцах ткани и секрета для выявления пациентов, не ответивших на лечение меполизумабом, и ответивших на него после 152 недель лечения меполизумабом.

2. Продемонстрировать эффект лечения меполизумабом у пациентов с назальными полипами с бронхиальной астмой или без нее за счет снижения числа пациентов, нуждающихся в хирургическом вмешательстве, после 52 недель лечения с учетом ремоделирования дыхательных путей, воспалительных клеток и биомаркеров воспаления и клинических характеристик.

   Другие цели/конечные точки Любое улучшение респираторных параметров при контроле астмы и качества жизни пациентов, включая качество сна, во время лечения меполизумабом у пациентов с назальными полипами с бронхиальной астмой или без нее.

   Любые возможные биомаркеры ответа с учетом полипов носа и бронхиальной астмы как единого заболевания дыхательных путей после 52 недель лечения и после 156 недель лечения.

   Характеристика приверженности пациентов к дозам меполизумаба в течение 156 недель.

   План исследования и методы Исследование фазы IV, в котором будут отобраны пациенты из амбулаторных клиник бронхиальной астмы и уха, носа и горла из каждого места, которое охватывает население Греции. В связи с неизвестной ситуацией, связанной с пандемией Covid-19, мы предполагаем, что это клиническое исследование не влияет на рабочую нагрузку в наших клиниках.

   В целом, это проспективное многоцентровое исследование, включающее 7 клиник. Исследование будет включать период скрининга продолжительностью до 2 недель для оценки приемлемости и получения письменного информированного согласия, а также период лечения меполизумабом продолжительностью 156 недель.

   Метод выборки, количество субъектов и сроки Исследуемая популяция Исследуемая популяция будет состоять примерно из 57 пациентов с полипозом носа с бронхиальной астмой или без нее, получающих меполизумаб в течение трех лет в возрасте 18 лет и старше (без детей). Клиническая оценка пациентов с полипозом носа с астмой или без нее будет проводиться в соответствии с Европейской позицией по риносинуситу и полипам носа. Кроме того, в стандарт лечения наших пациентов помимо меполизумаба могут входить ИГКС, антигистаминные или LTRA.

   Целевой набор Наш целевой размер выборки был рассчитан на основе того, что 57 пациентов были минимальным размером выборки, рассчитанным для толщины ретикулярной базальной мембраны из анализа g-степени (как описано в параграфе расчета размера выборки). Мы добавляем дополнительные 5%, чтобы обеспечить достоверность результатов в случае потенциального отказа пациентов во время нашего перспективного исследования.

   Участие в исследовании, оценка и последующее наблюдение:

   Жизненно важные показатели будут определяться при посещении учреждения при скрининговом посещении, на исходном уровне и каждые 3 месяца. Измерения будут включать систолическое и диастолическое артериальное давление, частоту пульса и температуру тела.

   Рост в сантиметрах (см) и масса тела в килограммах (кг) будут измеряться во время скрининговых посещений. Индекс массы тела (ИМТ) рассчитывается делением веса в кг на рост в метрах в квадрате.

   Лабораторная оценка (гематология, биохимический анализ крови, анализ мочи) включает анализ венозной крови и мочи на исходном уровне. Сбор мочи у женщин также позволит оценить беременность. Уровни IgE будут оцениваться при скрининговом посещении с использованием тестов ImmunoCAP и будут представлены в виде МЕ/мл.

   Анкеты Будут проводиться: 1) Анкета по контролю над астмой (ACQ-5) и Тест по контролю над астмой (ACT) для оценки текущего контроля над астмой; 2) Опросник качества жизни при астме (AQLQ+12) для оценки качества жизни и психологической заболеваемости. Для дальнейшей оценки качества сна 1) Афинская шкала бессонницы (AIS), 2) Шкала сонливости Эпворта (ESS), 3) Респираторный опросник Святого Георгия (SGRQ) и 4) Индекс благополучия ВОЗ (пять) (WHO-5), 5) Шкала тяжести усталости (FSS), 6) Оценка по визуальной аналоговой шкале (ВАШ), 7) Оценка исходного синоназального теста (SNOT-22), 8) Оценка теста идентификации запаха Пенсильванского университета (UPSIT).

   FeNO Уровень оксида азота в выдыхаемом воздухе (NO) будет измеряться исходно и каждые 6 месяцев в соответствии с рекомендациями Американского торакального общества и указаниями производителя. Уровни FeNO будут представлены в виде частей на миллиард. Измерения будут проводиться до проведения спирометрии.

   Уровни эозинофилов в крови Образцы венозной крови будут брать с 8 до 10 утра, в начале исследования и каждые 3 месяца в течение 156-недельного периода лечения меполизумабом. Абсолютное количество эозинофилов в крови будет указано в виде клеток/мкл.

   Спирометрия Спирометрия будет проводиться с использованием собственного оборудования учреждения при посещениях (исходно и каждые 3 месяца), как указано в таблице 1. Все визиты в клинику должны происходить утром. В течение периода лечения спирометрия будет соответствовать текущим рекомендациям ATS/ERS, а спирометр должен производить распечатку всех полученных данных, которые следует хранить в заметках пациента. Спирометр будет откалиброван в соответствии с инструкциями производителя. Спирометрию необходимо проводить одновременно (±1 час) со спирометрией визита 0. Субъекты должны попытаться воздержаться от приема бета-2-агонистов короткого действия (КДБА) в течение ≥4 часов и ДДБА за ≥15 часов до посещения клиники, если это возможно (GINA 2019). Записываемые оценки будут включать ОФВ1, ФЖЕЛ, ОФВ1/ФЖЕЛ%, ПСВ и ФЖЕЛ25-75. Постбронхорасширяющие измерения будут проводиться при каждом посещении с использованием 200-400 мкг альбутерола или его эквивалента.

   Импульсная осциллометрия Импульсная осциллометрия (IOS) будет проводиться на исходном уровне, через 52 недели лечения и через 156 недель лечения.

   Шкала Лунда-Маккея Оценка компьютерной томографии (КТ) Лунда-Маккея будет оцениваться по КТ синуса исходно, через 52 и 156 недель лечения, как указано в таблице 1. Предоперационная и послеоперационная КТ синуса используется в клинической практике у пациентов с ХРС в качестве стандарта. помощи в стране спонсора (доза облучения около 50 мГр). Постановка КТ по ​​Лунду-Маккею будет оцениваться вслепую двумя разными клиницистами.

   Пиковая скорость носового вдоха (PNIF) PNIF будет применяться на исходном уровне и каждые 6 месяцев до 156-недельного курса лечения. PNIF будет оцениваться с использованием фиброскопа Olympus ENF типа P4 и устройства Clement Clark International Limited модели IN-CHECK ORAL ATM.

   Передняя риноманометрия Передняя риноманометрия будет проводиться исходно и каждые 6 месяцев до 156-й недели лечения с помощью риноманометрической системы PDD-301/sr.

   Терапия биологическими препаратами По завершении визитов для скрининга участник может начать лечение биологической терапией (меполизумаб) в течение месяца. Во время терапии испытуемые будут находиться под наблюдением пульмонолога, направившего их в исследовательскую группу для участия в исследовании. Эти пульмонологи будут называться «младшими пульмонологами». Лечение будет проводиться в соответствии с инструкциями производителя продукта.

   Младшие пульмонологи и оторинологи, предоставляющие биологическую терапию во время исследования, должны будут подписать соглашение о проведении исследования в соответствии с протоколом, признать, что он/она несет ответственность за медицинское поведение и проведение исследования, а также обеспечить, чтобы ассоциированный (и их коллеги и сотрудники), оказывающие помощь в проведении исследования, информируются об их обязанностях.

   Будут созданы механизмы для обеспечения того, чтобы ассоциированный персонал получал соответствующую информацию и поддержку со стороны исследовательской группы на протяжении всего исследования.

   Последующее наблюдение во время биологической терапии: в начале и при каждом посещении для назначения биологической терапии сбор информации (см. таблицу 1) будет выполняться младшим пульмонологом и при поддержке исследовательской группы, если этого потребует младший пульмонолог, например, исследователи по телефону. или контакт лицом к лицу возьмет интервью у пациента. Кроме того, соблюдение будет зарегистрировано врачом на основании устного подтверждения пациента. При каждом посещении будет фиксироваться дата введения препарата, а также немедленные и отсроченные побочные эффекты.

   Мониторинг безопасности Зарегистрированные нежелательные явления (НЯ) будут отслеживаться и сопоставляться в соответствии с требованиями в отчетах об исследованиях.

   Нежелательные явления Нежелательным явлением является появление или ухудшение любого нежелательного признака, симптома или состояния здоровья, возникающее после начала участия в исследовании. Медицинские состояния/заболевания, имевшиеся до начала приема исследуемого препарата, считаются нежелательными явлениями только в том случае, если они ухудшаются после начала приема исследуемого препарата. Аномальные лабораторные значения или результаты анализов представляют собой нежелательные явления только в том случае, если они вызывают клинические признаки или симптомы, считаются клинически значимыми или требуют лечения. Также включены нежелательные явления, связанные с Covid-19. Если партнер-пульмонолог или исследовательский персонал узнают о НЯ, связанном с продуктом, об этом можно сообщить производителю в соответствии с их местной стандартной практикой для спонтанных сообщений о НЯ. Копия отчета также должна быть отправлена ​​координатору исследования. О серьезных нежелательных явлениях (СНЯ) будет сообщено на страницах eCRF, и в течение 24 часов все следователи будут обязаны проинформировать Центральный комитет в Салониках. Затем ЦК проинформирует научный совет и Греческое медицинское агентство. Кроме того, главный исследователь каждого центра вместе с Центральным комитетом будет принимать медицинские и научные решения при принятии решения о том, следует ли субъекту прекратить лечение или нет.

   Независимый комитет по мониторингу данных/Совет по мониторингу данных и безопасности (IDMC/DSMB) является центральным исследовательским персоналом в Салониках (Центральный комитет). Для успешного мониторинга оценок протоколов IDMC/DSMB будет ежемесячно планировать телефонные звонки на все включенные сайты.

   Константинос Порподис - главный исследователь (доцент, отделение пульмонологии, Университет Аристотеля в Салониках, больница Джорджа Папаниколау, Салоники), Каллиопи Домври - младший научный сотрудник по клиническим исследованиям, руководитель исследования, младший исследователь, Лаборатория гистологии-эмбриологии, Медицинская школа, Университет Аристотеля в Салониках .

   Отчет о беременности Первоначально пациентки женского пола при скрининге должны будут пройти тест на беременность. Во время лечения, если субъект женского пола сообщает нам о беременности, ее попросят выйти из исследования (для предотвращения систематической ошибки). Затем ее спросят, хочет ли она продолжать лечение вне этого протокола и находиться под наблюдением в поликлинике каждого центра.

   Предварительный скрининг и неудачи скрининга Субъектам будет присвоен номер исследования во время подписания согласия. Субъекты, которые подписались, но не прошли оценку посещений скрининга, будут считаться не прошедшими скрининг. Данные по этим субъектам не будут занесены в базу данных.

   Субъекты, завершившие хотя бы одно из двух визитов для скрининга, но не начавшие биологическую терапию, будут считаться неудачниками скрининга.

   Информация, которую необходимо собрать для предварительного скрининга и сбоев скрининга, будет подробно описана при заполнении базы данных.

   Визит с выходом из исследования Если участник решает выйти из исследования во время последующего наблюдения (по любой причине, кроме потери возможности наблюдаться), его могут попросить посетить визит для выхода из исследования (если исследователь сочтет это необходимым и при наличии согласия). Во время посещения участнику могут быть заданы вопросы об их текущем состоянии в рамках сбора клинической информации, такой как: астма и назальные симптомы, обострения и прогрессирование получаемого лечения.

   Сбор и обработка образцов крови Образцы крови будут собираться при исходном посещении, через 6 месяцев и после завершения лечения.

   Индуцированная мокрота. Индуцированная мокрота будет проводиться на исходном уровне до начала лечения и через 52 и 156 недель лечения в соответствии с отчетом Целевой группы ERS, в котором предлагается подробная, основанная на консенсусе экспертов рекомендация по обработке индуцированной мокроты. После сбора индуцированной мокроты супернатант образца будет храниться при температуре -20°C в пробирках Эппендорф до проведения анализа.

   Бронхоскопия, биопсия бронхов/носа и сбор и обработка образцов смыва Эндоскопия с биопсией бронхов, образец смыва бронхов будет проводиться с письменного согласия пациента. В частности, будет включено отдельное информированное согласие, которое будет подписано каждым пациентом. Бронхоскопия будет проводиться в трех временных точках (исходный уровень до начала лечения, через 52 недели лечения и через 156 недель лечения). Гибкая бронхоскопия и диагностические методы выполнялись под контролем анестезии в соответствии с рекомендациями Американского торакального общества и Британского торакального общества.

   Назальные биопсии будут выполняться при исходном посещении, через 52 и 156 недель лечения по письменному согласию пациента. Эндоскопическая хирургическая процедура будет выполняться носовыми ножницами путем разрезания ткани и последующего удаления образца. Метод будет выполняться как функциональная эндоскопическая хирургия околоносовых пазух (FESS), минимально инвазивная техника под прямой визуализацией. Эндоскопическая процедура требует местной анестезии. Специфическими особенностями, которые будут выявлены и оценены во время осмотра, являются средняя носовая раковина и средний носовой ход (остеомеатальный комплекс), анатомическая непроходимость, слизистый гной и носовые полипы.

   После эндоскопических процедур образцы тканей фиксируют путем надувания или погружения с использованием формальдегида или глутарового альдегида и заливают в парафин. Образцы дыхательных путей будут систематически браться или получаться во время диагностического рассечения по усмотрению патологоанатома. Ремоделирование дыхательных путей будет оцениваться не только с помощью оптической микроскопии, но и с помощью электронной микроскопии.

   Наконец, образцы смыва бронхов будут немедленно доставлены в лабораторию для хранения при температуре -80 градусов. На более позднем этапе будет проведено исследование жидкостей для промывания бронхов для определения нескольких биомаркеров с помощью RT-PCR, ELISA и проточной цитометрии, как описано в следующем абзаце.

   Для оценки биомаркеров воспаления в тканях, крови и других биологических жидкостях будет проводиться анализ проточной цитометрии (FACS) с использованием гранул или методом ELIZA. Иммунофенотип будет проанализирован с помощью FACS. Экспрессию биомаркеров будут оценивать с помощью ОТ-ПЦР. Биомаркер будет оцениваться до начала, через 1 год и после 156 недель лечения меполизумабом.

   Анализ микробиома Образцы микробиома будут взяты на исходном уровне и через 52 недели лечения. Количественная оценка общего количества бактерий, конкретных таксонов и производительности бутирата будет проводиться с помощью количественной ПЦР с использованием системы термоциклера BioRad iCycler iQ (BioRad, Hercules, CA).

   Тестирование на аллергию (если применимо) Атопический статус пациентов будет оцениваться (если он недоступен) при скрининговом посещении с помощью кожного прик-теста (КПТ) на стандартной панели аэроаллергенов для выявления суммарных антител IgE к различным распространенным ингаляционным аллергенам.

   Расчет размера выборки Анализ G-мощности Размер выборки рассчитывается с использованием программного обеспечения G*Power (Die Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Германия). Разница в толщине ретикулярной базальной мембраны до и после лечения меполизумабом для исследования ремоделирования дыхательных путей у пациентов с хроническим риносинуситом с назальными полипами с бронхиальной астмой или без нее является одной из наших основных конечных точек. В исследовании Diver et al. сообщалось, что толщина ретикулярной базальной мембраны до и после лечения тезепелумабом составляла 3,86 ± 1,54 против 3,35 ± 1,34 соответственно. Используя эти данные и двусторонний тест с мощностью 0,95 и уровнем статистической значимости 0,05, мы рассчитали размер эффекта 0,49, что указывает на общий размер выборки 57 участников.

   Сара Дайвер, Латифа Халфауи, Клэр Эмсон, Салли Э. Вензел, Эндрю Мензис-Гоу, Майкл Э. Векслер, Джеймс Джонстон, Нестор Мольфино, Джейн Р. Парнс, Айман Мегалли, Джин Колис, Кристофер Э. Брайтлинг, исследователи исследования CASCADE. Влияние тезепелумаба на воспалительные клетки дыхательных путей, ремоделирование и гиперреактивность у пациентов с неконтролируемой астмой средней и тяжелой степени (CASCADE): двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое исследование 2 фазы. Ланцет Респир Мед. 2021 ноябрь;9(11):1299-1312.

   Анализ статистического плана Статистический анализ будет выполняться с использованием SPSS (статистическое программное обеспечение IBM SPSS версии 21.0, Армонк, штат Нью-Йорк, США). Категориальные переменные будут указаны как числа (n) и проценты (%), непрерывные переменные как среднее ± стандартное отклонение, если они нормально распределены, или медианы и межквартильные диапазоны, если иное. При необходимости переменные без нормального распределения будут преобразованы. Р < 0,05 считалось статистически значимым. Будет проведен тест Шапиро-Уилка, чтобы отделить параметрические переменные от непараметрических. Т-критерий парных выборок для параметрических параметров или критерий Вилкоксона для непараметрических переменных будут использоваться для выявления различий в переменных, измеренных до и после лечения меполизумабом у пациентов с ХРС с назальными полипами с астмой или без нее по гистопатологическим, кровяным или клиническим параметрам. .

   Нет руки сравнения, так как каждый пациент контролирует сам себя. Существуют исходные характеристики (клинические и лабораторные биомаркеры), которые будут измеряться на исходном уровне, каждые 6 месяцев, через 52 и 156 недель после завершения лечения. Первичной конечной точкой являются изменения ремоделирования дыхательных путей как в носу, так и в бронхах.

   Конечные точки исследования также включают анализ всех этих биомаркеров для выявления характеристик нереспондеров и суперреспондеров. Также вторичные конечные точки включают оценку биомаркеров, упомянутых в методах в качестве оценок. Сначала будет проведен статистический анализ числа пациентов, завершивших 52-недельный период лечения и 156-недельный период. Во-вторых, пациенты, которые не завершили лечение, будут проанализированы отдельно, и, наконец, эти две группы будут сравниваться друг с другом.

   Ремоделирование дыхательных путей и общий ответ на лечение, а также через один и три года (от исходного уровня до 1 года после начала лечения) для каждого исхода будут измеряться с помощью парного теста зависимых выборок (параметрические и непараметрические парные тесты) у каждого пациента. Тогда ответ на лечение будет определяться как изменение (абсолютное и процентное изменение) исхода через один и три года. Мы оценим предикторы, влияющие на ответ на лечение (изменение), такие как биомаркеры, с помощью моделей множественной регрессии для каждого клинико-патологического исхода. Для результатов с более чем 2 наблюдениями на субъекта в течение периода исследования мы будем использовать смешанные модели, используя повторные измерения результата. Все тесты будут двусторонними с уровнем статистической значимости 5%.

   База данных

   Метод сбора данных:

   Платформа электронного сбора данных будет методом, используемым на исходном уровне каждые 3 месяца до последующего 1 года для этой базы данных. Во время лечебных визитов бумажные формы/анкеты заполняются младшим пульмонологом/оториноларингологом. Каждый сайт будет вносить определенные данные в электронную базу данных. Каждый пациент однозначно идентифицируется по номеру субъекта, который состоит из номера центра, присвоенного ответственным центром мониторинга, и порядкового номера, присвоенного исследователем. После подписания формы информированного согласия пациенту исследователь присваивает следующий порядковый номер. Сайт должен связаться с центральным исследовательским персоналом и предоставить запрошенную идентификационную информацию для пациента, зарегистрированного в электронной базе данных. Бланки визитов для лечения также будут отправлены центральному исследовательскому персоналу. Уполномоченный исследовательский персонал будет нести ответственность за сбор данных, редактирование, а также защиту данных, собираемых на их собственном сайте, а база данных ежедневно резервируется. Обзор/контроль качества будет совместной обязанностью всех вовлеченных лиц и центрального исследовательского персонала [хранителя данных].