Biologická prospektivní studie u pacientů s metastatickými pankreatickými NETs léčenými everolimem

• Pozadí:: Everolimus byl hlášen jako účinný ve srovnání s placebem u dobře/středně diferencovaných pankreatických NET z hlediska zlepšení přežití bez progrese (PFS). Řada pacientů je však rezistentních již předem nebo se stane rezistentní po několika měsících léčby. Proto je klíčové detekovat některé biologické faktory, které mohou pomoci identifikovat responzivní nádory. Everolimus je biologické činidlo a jeho mechanismus účinku může být částečně zaměřen na angiogenezi. To lze studovat na různých úrovních a různými metodami. Předběžné a časné náhradní prediktivní markery aktivity/účinnosti lze studovat na nádorové tkáni, na zobrazování nádorů a na periferní krvi. Studie nádoru s difuzní MRI a angiogenními cirkulujícími markery mohou být studovány také jako markery odpovědi ve srovnání s morfologickým zobrazením.

• Materiály a metody :

  1. Cirkulující endoteliální buňky (CEC) a Cirkulující endoteliální progenitory (CEP) budou provedeny průtokovou cytometrií. Mezi monoklonální protilátky používané pro vyhledávání CEC a CEP patří: shluk diferenciačního antigenu 45 (CD45), CD31, CD133, CD146, CD34, VEGFR-2, 7-amino-aktinomycin D (7-AAD) a Syto1. V periferní krvi bude dále detekován vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGF), základní fibroblastový růstový faktor (bFGF), VEGFR-2 a trombospondin-1 (TSP-1).

  2. Na nádorové tkáni budou provedena následující stanovení, včetně:

     • somatostatinový receptor podtypu 2,
     • Fosfo-AKT
     • Fosfo-mTOR
     • Fosfo-4E-BP1
     • Fosfo-p70-S6 kináza Králičí antituberózní skleróza komplex 2 (TSC2) Cell Signaling Technology
     • Myš anti-PTEN Cell Signaling Technology
  3. Ukázalo se, že difúzně vážené zobrazování (DWI) je schopno poskytnout informace týkající se buněčné hustoty a vlastností extracelulární matrice a hodnota zdánlivého difúzního koeficientu (ADC) vypočítaná pomocí DWI může sloužit jako marker celularity. Vzhledem k tomu, že k buněčnosti nádoru přispívá z velké části buněčná proliferace, hodnota ADC může být náhradním biomarkerem proliferaci nádorových buněk. ADC-magnetická rezonance (MRI) bude provedena na začátku, po 1 měsíci a po třech měsících terapie.
• Studovat design

Výchozí stav, po 1 měsíci léčby, po třech měsících léčby a při progresi:

• Břicho DWI-MRI
• CEC, CEPs
• Cirkulující VEGF, VEGFR-2, bFGF, TSP-1

Základní biopsie metastatického ložiska a možná nová biopsie v době progrese nádoru

Korelace biologických parametrů s klinickým výsledkem (odpověď nádoru a přežití bez progrese, kritéria hodnocení odpovědi u solidních nádorů, kritéria RECIST 1.0)

• Statistická analýza: Jedná se o průzkumnou studii o potenciální prediktivní hodnotě některých biologických faktorů (mezi nimi CEC, VEGF a bFGF) vyjádřené ve smyslu snížení rizika progrese u pacientů s pokročilými pankreatickými NET léčenými everolimem.

Použijeme dvoustranný log-rank test (α = 0,05, 1-β = 0,20) k testování hypotézy o 30% snížení rizika (míra rizika; HR) rovnající se HR = 0,30 pro ty, kteří patří do následujících vrstev :

• ≥ 2,2/ul vs < 2,2/ul pro CEC při bazální nebo
• ≤ 65,6 vs > 65,6 pro hladiny FGF po dvou měsících od zahájení léčby nebo
• ≤ 32,5 vs > 32,5 pro hladiny VEGF po dvou měsících od zahájení léčby Velikost vzorku se vypočítá tak, aby kompenzovala ztrátu výkonu log-rank testu za předpokladu průměrného a jednotného log-rank testu o 10 % a s ohledem na že prahové hodnoty se týkají distribuce 25., 75. a 50. percentilu CEC, bFGF a VEGF. Pokud vezmeme v úvahu nárůst 20 pacientů/rok, dobu léčby 12 týdnů s následným sledováním 1 rok a pro velikost vzorku 43 pacientů, bude mít studie celkovou délku přibližně 3 roky a 6 měsíců.