Uno studio prospettico biologico in pazienti con NET pancreatiche metastatiche trattati con Everolimus

• Contesto: Everolimus è stato riportato essere efficace rispetto al placebo nei NET pancreatici ben/moderatamente differenziati in termini di miglioramento della sopravvivenza libera da progressione (PFS). Tuttavia, un certo numero di pazienti è refrattario all'inizio o diventa resistente dopo pochi mesi di terapia. Pertanto, è fondamentale rilevare alcuni fattori biologici che possono aiutare a identificare i tumori responsivi. Everolimus è un agente biologico e il suo meccanismo d'azione può essere parzialmente diretto verso l'angiogenesi. Questo può essere studiato a diversi livelli e con diversi metodi. Marcatori predittivi iniziali e surrogati di attività/efficacia possono essere studiati sul tessuto tumorale, sull'imaging tumorale e sul sangue periferico. Lo studio del tumore con diffusione-MRI e marcatori circolanti angiogenici possono essere studiati anche come marcatori di risposta rispetto all'imaging morfologico.

• Materiale e metodi :

  1. Le cellule endoteliali circolanti (CECs) e le progenitrici endoteliali circolanti (CEPs) saranno eseguite mediante citometria a flusso. Gli anticorpi monoclonali utilizzati per la ricerca di CEC e CEP includono: cluster of differenziation antigen 45 (CD45), CD31, CD133, CD146, CD34, VEGFR-2, 7-amino-actinomicina D (7-AAD) e Syto1. Il fattore di crescita dell'endotelio vascolare (VEGF), il fattore di crescita basico dei fibroblasti (bFGF), il VEGFR-2 e la trombospondina-1 (TSP-1) saranno rilevati anche nel sangue periferico.

  2. Sul tessuto tumorale verranno eseguite le seguenti determinazioni, tra cui:

     • Recettore della somatostatina sottotipo 2,
     • Fosfo-AKT
     • Fosfo-mTOR
     • Fosfo-4E-BP1
     • Phospho-p70-S6 chinasi Rabbit anti-tuberous sclerosis complex 2 (TSC2) Tecnologia di segnalazione cellulare
     • Tecnologia di segnalazione cellulare anti-PTEN del topo
  3. L'imaging pesato in diffusione (DWI) ha dimostrato di essere in grado di fornire informazioni riguardanti la densità cellulare e le proprietà della matrice extracellulare e il valore del coefficiente di diffusione apparente (ADC) calcolato utilizzando DWI può fungere da marker di cellularità. Dato che la cellularità del tumore è in gran parte fornita dalla proliferazione cellulare, il valore ADC può essere un biomarcatore surrogato per la proliferazione delle cellule tumorali . L'ADC-risonanza magnetica (MRI) verrà eseguita al basale, dopo 1 mese e dopo tre mesi di terapia.
• Progettazione dello studio

Basale, dopo 1 mese di terapia, dopo tre mesi di terapia e alla progressione:

• Addome DWI-MRI
• CEC, CEP
• VEGF circolante, VEGFR-2, bFGF, TSP-1

Biopsia basale di un sito metastatico e possibilmente una nuova biopsia al momento della progressione del tumore

Correlazione dei parametri biologici con l'esito clinico ( risposta del tumore e sopravvivenza libera da progressione, Criteri di valutazione della risposta nei tumori solidi , Criteri RECIST 1.0)

• Analisi statistica: si tratta di uno studio esplorativo sul potenziale valore predittivo di alcuni fattori biologici (CECs, VEGF e bFGF tra questi) espressi in termini di riduzione del rischio di progressione in pazienti con NET pancreatici avanzati trattati con Everolimus.

Utilizzeremo il log-rank test a due code (α = 0.05, 1-β = 0.20) per testare l'ipotesi del 30% di riduzione del rischio (hazard rate; HR) pari a HR = 0.30 per gli appartenenti ai seguenti strati :

• ≥ 2,2/uL vs < 2,2/uL per CEC al basale o
• ≤ 65,6 vs > 65,6 per i livelli di FGF dopo due mesi dall'inizio del trattamento o
• ≤ 32,5 vs > 32,5 per i livelli di VEGF dopo due mesi dall'inizio del trattamento La dimensione del campione è calcolata per compensare la perdita di potenza del log-rank test ipotizzando un drop-out medio e uniforme del log-rank test del 10% e tenendo presente che i valori di soglia si riferiscono rispettivamente alle distribuzioni del 25°, 75° e 50° percentile di CEC, bFGF e VEGF. Considerando un accrual rate di 20 pazienti/anno, un periodo di trattamento di 12 settimane con un follow-up di 1 anno e per un campione pari a 43 pazienti, lo studio avrà una durata complessiva di circa 3 anni e 6 mesi.