Identificazione di cellule tumorali polmonari in fase iniziale in campioni di versamento pleurico maligno da pazienti con carcinoma polmonare primitivo

OBIETTIVI:

• Isolare e identificare le cellule precursori del cancro del polmone nei campioni di liquido pleurico scartati ottenuti durante le procedure di toracentesi di routine per la diagnosi e il trattamento dei versamenti pleurici maligni.

SCHEMA: I campioni di versamento pleurico maligno ottenuti dal Dipartimento di Patologia presso gli Ospedali Universitari di Cleveland vengono analizzati utilizzando un saggio di arricchimento di sfere immunomagnetiche per isolare le cellule di origine epiteliale. Le cellule isolate vengono quindi colorate con colorante legante il DNA fluorescente, Hoechst 33342 e altri marcatori (ad esempio, CD133, CD24/CD44) e ordinate mediante citometria a flusso in sottopopolazioni progenitrici e non progenitrici. Le sottopopolazioni ordinate sono separate ed esaminate funzionalmente mediante studi in vitro e in vivo. Gli studi sulla cultura della sfera vengono eseguiti anche sulle sottopopolazioni ordinate. I campioni possono anche essere utilizzati per studi di profilazione trascrizionale, studi RNAi e per la creazione di colture a lungo termine e linee cellulari. Il DNA è anche isolato e immagazzinato dal tumore e dai compartimenti cellulari normali non epiteliali per futuri studi genetici su anomalie genetiche note e non identificate che contribuiscono allo sviluppo del cancro del polmone, come lo stato mutazionale di EGFR, ErbB2, K-ras e p53.