Trasferimento genico per l'anemia falciforme

Questo è uno studio di coorte in aperto, non randomizzato, a centro singolo, pilota e di fattibilità, a braccio singolo che coinvolge una singola infusione di cellule HSC CD34+ derivate da midollo osseo autologhe trasdotte con il vettore lentivirale contenente un RNA a forcina corta mirato a BCL11a. L'arruolamento sarà un massimo di 7 pazienti valutabili con SCD. Lo studio avrà tre strati:

1. Strato 1: età ≥18-40
2. Strato 2: età ≥12-<18
3. Strato 3: età ≥3-<12

Determinare la fattibilità e la sicurezza della somministrazione di un vettore di trasferimento genico lentivirale che codifica un piccolo RNA a forcina (sh) mirato al repressore del gene γ-globina, BCL11A, in pazienti con SCD grave.

I pazienti verranno sottoposti a procedure standard per il trapianto di midollo osseo autologo secondo le linee guida istituzionali e quindi sottoposti a due prelievi di midollo osseo a distanza minima di 4 settimane che verranno utilizzati per un midollo di backup (minimo 2 x 106 cellule CD34+/kg ) e per un prelievo di midollo osseo autologo per il trasferimento genico.

I pazienti riceveranno trasfusioni di sangue per un periodo di 3 mesi prima della data pianificata di infusione del prodotto, con l'obiettivo di raggiungere un livello di HbS ≤ 30% entro il momento del trasferimento genico. Se il soggetto è già in regime trasfusionale cronico come parte della gestione della malattia di base, il regime può essere continuato. La tempistica delle trasfusioni sarà coordinata in modo che avvenga entro 7 giorni prima di qualsiasi procedura che richieda l'anestesia come il prelievo di midollo osseo.

Le cellule ematopoietiche verranno raccolte dal paziente prima del trattamento, per fungere da procedura di salvataggio ("innesto di riserva"), nel caso in cui non si osservi alcun recupero ematopoietico dopo l'iniezione di cellule manipolate geneticamente o nel caso in cui le cellule manipolate falliscano per soddisfare i criteri di rilascio. Il midollo osseo (fino a 20 ml/kg) verrà prelevato dal paziente in anestesia generale dalle creste iliache posteriori su entrambi i lati mediante punture multiple almeno 4 settimane prima della terapia genica. Una porzione di midollo osseo contenente almeno 2 x 106 cellule CD34+/kg sarà congelata e conservata non manipolata secondo le procedure cliniche standard per il prelievo di midollo osseo autologo per costituire l'innesto di riserva. Se il numero di cellule CD34+ che supera 2 x 106 cellule/kg è maggiore o uguale a 1 x 106 cellule/kg, queste cellule in eccesso verrebbero processate per la trasduzione, trasdotte e quindi congelate. La trasduzione sarà effettuata sulle cellule CD34+ selezionate e le cellule trasdotte saranno criopreservate. Se le cellule del primo raccolto sono state trasdotte e congelate, queste cellule geneticamente modificate saranno scongelate e preparate per l'infusione in parallelo con il prodotto del/i successivo/i raccolto/i. In questo caso verrebbero infusi due prodotti separati. Tutte le procedure di manipolazione cellulare e i test di rilascio saranno eseguiti nella struttura di trasduzione in conformità con le buone pratiche di fabbricazione (GMP) seguendo procedure operative standard specifiche del processo. Il prodotto farmaceutico finale sarà accompagnato da un certificato di analisi, che documenta che tutti i test di rilascio sono completi e conformi alle specifiche. I soggetti riceveranno condizionamento mieloablativo con Busulfan somministrato nei giorni da -5 a -2, prima dell'infusione di cellule trasdotte. Le cellule verranno infuse per via endovenosa nell'arco di 30-45 minuti dopo la preidratazione e la premedicazione standard secondo le linee guida standard dell'Unità di trapianto di cellule staminali ematopoietiche del Boston Children's Hospital. Questo standard richiede che il paziente sia costantemente monitorato per la saturazione cardiaca, respiratoria e di ossigeno durante l'infusione e per i 30 minuti successivi. I segni vitali saranno misurati e registrati prima della trasfusione, 15 minuti dopo la trasfusione, ogni ora per la durata dell'infusione e alla fine della trasfusione. L'infermiere rimarrà con il paziente per i primi 5 minuti della trasfusione. Se vengono somministrati due prodotti di trasduzione, il secondo prodotto trasdotto verrà somministrato senza indugio dopo il primo.