Identificazione di autoantigeni nell'EGPA e nell'asma eosinofilo grave (IDEA)

I ricercatori affronteranno la domanda di ricerca con approcci paralleli agnostici e mirati.

Nell'approccio agnostico la presenza di autoanticorpi nel siero e nell'espettorato del paziente contro eosinofili inattivi e attivati, con e senza modificazione post-traduzionale, sarà esaminata mediante immunofluorescenza indiretta.

Nell'approccio mirato i ricercatori esamineranno mediante saggio immunologico enzimatico (ELISA) la presenza/assenza di anticorpi contro le proteine ​​preselezionate di eosinofili e di membrana di base sia in forma nativa che modificata post-traduzionalmente. Le proteine ​​da esaminare saranno scelte in base alla revisione della letteratura (ad es. perossidasi eosinofila e collagene V) e proteine ​​specifiche degli eosinofili identificate dall'analisi del geneset FANTOM5 (Functional Annotation of the Mouse/Mammalian Genome) (FANTOM Consortium et al. 2014).

Verranno esaminati sia campioni di sangue che di espettorato di pazienti altamente caratterizzati con asma eosinofilo grave e/o EGPA data la possibilità di risposte immunitarie compartimentali.

Una volta che gli autoantigeni candidati sono stati identificati nel gruppo selezionato di pazienti con asma eosinofilo grave ed EGPA, i ricercatori esamineranno quindi la loro prevalenza in campioni di siero da una più ampia selezione di pazienti con malattie eosinofile delle vie aeree tra cui asma da lieve a moderato, asma grave asma eosinofilo, EGPA, poliposi nasale e broncopneumopatia cronica ostruttiva eosinofila (BPCO) nonché controlli sani. Lunghezza della malattia, atopia, presenza/assenza di polipi nasali, sesso, età saranno esaminati come co-variabili. Correlazioni con il più alto numero di eosinofili nel sangue, necessità di corticosteroidi orali e presenza di altri autoanticorpi, ad es. saranno esaminati gli ANCA anti-MPO (mieloperossidasi) (anticorpo citoplasmatico anti-neutrofilo). In particolare i ricercatori cercheranno la presenza di nuovi autoanticorpi in specifici sottogruppi di pazienti: i) ANCA negativi, ii) ANCA positivi mediante immunofluorescenza ma negativi per anticorpi anti-MPO e anti-PR3 (proteinasi-3), iii) ANA (anti -anticorpo nucleare) positivo ma ANCA e antigene nucleare estraibile (ENA) negativo; poiché i pazienti in tutti e tre i gruppi possono avere autoanticorpi nuovi, non ancora determinati. Saranno condotte analisi ROC (curva caratteristica dell'operatore ricevente) AUC (area sotto la curva) per accertare il valore predittivo degli autoanticorpi nel sangue per la diagnosi della malattia eosinofila delle vie aeree.