Badanie fazy II lenwatynibu jako jedynego agenta

Tło i uzasadnienie badania:

A. RET i oporność endokrynologiczna w raku piersi RET jest genem odpowiedzialnym za odpowiedź na estrogen, a badania przedkliniczne wykazały krzyżowanie się RET i ER. Opisano istotne interakcje między szlakami RET i ERα, ze zwiększoną odpowiedzią na stymulację estrogenową obserwowaną w obecności funkcjonalnego RET. RET wiąże się z opornością na tamoksyfen i inhibitory aromatazy, a zwiększoną ekspresję RET wykazano w hormonoopornych liniach komórkowych i guzach pierwotnych. Skojarzona terapia antyestrogenowa i anty-RET w raku piersi miała większy wpływ na wzrost komórek niż którakolwiek z tych terapii sam. Te dwie klasy leków mają różne mechanizmy działania; TKI RET zmniejszały wzrost poprzez indukcję apoptozy, podczas gdy anty-ERα zmniejszało proliferację komórek, tworząc biologiczną podstawę podwójnego leczenia. Podwójna terapia z tamoksyfenem i wandetynibem, inhibitorem RET, spowodowała większe zmniejszenie tempa wzrostu guza w ksenoprzeszczepach MCF7 u myszy W małym badaniu stwierdzono, że .RET ulega nadekspresji do 75% raków piersi ER+ (n=20), w porównaniu z zaledwie 10% raków piersi ER-ujemnych (n=10). Niedawno badacze przebadali 94 archiwalne próbki raka piersi z Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego w Singapurze i stwierdzili, że nadekspresja RET (2-3+) występuje w 59% przypadków raka piersi ER-ujemnego (n=39) i 62% przypadków ER dodatnie raki piersi (n=55)

Doświadczenie kliniczne w łączeniu inhibitorów RET z terapią hormonalną w raku piersi jest ograniczone, zgłoszono tylko jedno badanie z zastosowaniem wandetanibu. W tym badaniu 127 pacjentek po menopauzie z przerzutowym rakiem piersi z obecnością receptorów hormonalnych i przewagą kości zostało losowo przydzielonych do grupy otrzymującej sam fulwestrant w porównaniu do grupy otrzymującej fulwestrant w skojarzeniu z wandetanibem. Nie odnotowano różnic w odsetku korzyści klinicznych, przeżycia wolnego od progresji choroby ani przeżycia całkowitego między dwiema grupami leczenia. Wandetanib jest jednak słabszym inhibitorem RET niż lenwatynib. Lenwatynib został uznany za lek sierocy w leczeniu raka tarczycy przez Amerykańską Agencję ds. Żywności i Leków w 2013 r., ale nie jest aktywnie rozwijany w leczeniu raka piersi.

Badacze przetestowali 9 linii komórkowych raka piersi ER+ pod kątem ekspresji RET za pomocą Western blot i zidentyfikowali 4 z wysoką ekspresją (BT474, MB361, HCC1419, UACC812), 2 z normalną ekspresją (MCF7, CAMA1) i 3 z niską ekspresją (T47D, ZR-75-1, BT483). Aby ocenić efekty połączenia lenwatynibu z terapią hormonalną w liniach komórkowych raka piersi ER+ o różnej ekspresji RET, badacze przeprowadzili eksperymenty z wykorzystaniem 6 linii komórkowych, w tym 2 z wysoką ekspresją RET (BT474, MB361), 2 z prawidłową ekspresją RET (MCF7, CAMA1) i 2 z niską ekspresją RET (T47D, ZR-75-1). Dla każdej linii komórkowej ustalono IC50 dla samego tamoksyfenu i lenwatynibu, a następnie zastosowano terapię skojarzoną w 3 różnych dawkach dla każdego leku. Apoptozę i proliferację komórek mierzono odpowiednio przy użyciu testów kaspazy 3/7 i MTT. Wstępne eksperymenty wykazały, że lenwatynib wykazuje aktywność w liniach komórkowych raka piersi ER-dodatnich, niezależnie od poziomu ekspresji RET. Lenwatynib był co najmniej addytywny z tamoksyfenem we wszystkich 6 testowanych liniach komórkowych raka piersi ER-dodatnich, przy czym kombinacja dawała ≥50% zabijania komórek w porównaniu z tamoksyfenem stosowanym w monoterapii w liniach komórkowych BT474, CAMA1 i T47D. Te przedkliniczne obserwacje wskazują na potencjalną rolę lenwatynibu w skojarzeniu z terapią hormonalną w leczeniu ER-dodatnich raków piersi.

Komórki wysiano na 96-studzienkowe płytki i po 24 godzinach komórki traktowano jednocześnie tamoksyfenem i lenwatynibem w różnych dawkach (tamoksyfen w stężeniu 0, 1 lub 5 µM, lenwatynib w stężeniu 0, 5, 10 µM) i inkubowano przez 72 godziny. Żywotność komórek oceniano za pomocą testu CCK-8.

B. Wstępna obserwacja klinicznej aktywności lenwatynibu w monoterapii w raku piersi z obecnością receptorów hormonalnych

Badacze postawili wcześniej hipotezę, że połączenie inhibitora RET, takiego jak lenwatynib, z terapią hormonalną może nasilać działanie przeciwnowotworowe w raku piersi z obecnością receptorów hormonalnych. Badacze rozpoczęli ostatnio badanie lenwatynibu + letrozolu jako terapii neoadiuwantowej u pacjentek z rakiem piersi z obecnością receptorów hormonalnych. Kwalifikujący się pacjenci byli leczeni lenwatynibem w monoterapii przez dwa tygodnie, a następnie przez 12 tygodni lenwatynib + letrozol. Do badania włączono dwóch pacjentów, a badacze zaobserwowali zmniejszenie guza o 10-15% w badaniu ultrasonograficznym po 2 tygodniach monoterapii lenwatynibem. Aby potwierdzić te interesujące obserwacje, badacze zamierzają leczyć większą grupę pacjentek z nowo zdiagnozowanym rakiem piersi we wczesnym stadium, oczekujących na ostateczną operację raka piersi, za pomocą około 2-tygodniowej monoterapii lenwatynibem, stosując projekt „okna możliwości”, oraz ocenić guza odpowiedź na USG i zmiany histologiczne z biopsji guza przed i po leczeniu. Ten projekt pozwoli badaczom rozszerzyć populację docelową w celu szybkiej rekrutacji, aby uzyskać szybki sygnał aktywności biologicznej lenwatynibu w przypadku raka piersi u ludzi in vivo.