Vliv vitamínu C na celkovou oxidační kapacitu GCF u kuřáků s parodontitidou

Všichni jedinci byli vyšetřeni komplexním periodontálním vyšetřením a byly získány úplné periodontální diagramy a byly pořízeny periapikální rentgenové snímky plných úst pomocí techniky paralelního dlouhého kužele v době počátečního vyšetření k potvrzení diagnózy.

Obě skupiny (kuřáci s periodontitidou stupně III-IV stupně B) podstoupily olupování celých úst a hoblování kořenů pomocí ultrazvukového scaleru a ručních nástrojů v lokální anestezii, a to během 2 návštěv. Pacientům byla poskytnuta pečlivá instruktáž o vlastních opatřeních pro kontrolu zubního plaku: dvakrát denně čištění zubů kartáčkem a zubní pastou a jednou denně mezizubní čištění pomocí trojúhelníkových dřevěných trsátek a/nebo mezizubních kartáčků vyplachování ústní vodou s 0,125 % chlorhexidinu HCL (Hexitol®). používá se dvakrát denně po dobu 2 týdnů. Skupina II dostávala antioxidant vit C 2 gramy/den po dobu čtyř týdnů.

Odběr vzorku gingivální crevikulární tekutiny (GCF):

V obou skupinách byly vzorky GCF odebrány při úvodní návštěvě a znovu odebrány 3 měsíce po nechirurgické léčbě následujícím způsobem: ve vybrané oblasti (nejvíce postižené místo parodontu) byly pečlivě odstraněny všechny klinicky detekované supragingivální plaky, aby se minimalizovala kontaminace papírové proužky u plakety. Vybrané zuby byly poté jemně omyty vodou a studovaná místa byla izolována bavlněnými smotky, aby se zabránilo kontaminaci slinami, a jemně vysušena vzduchovou stříkačkou. Proužky filtračního papíru byly umístěny na vstupu do štěrbiny a byly ponechány na místě po dobu 30 sekund) a poté umístěny do plastového eppendorfu. Proužky s jakýmkoli plakem, slinami nebo kontaminací krve byly zlikvidovány. Vzorek z jednotlivého místa byl skladován při -80 °C pro pozdější zpracování. GCF byl poté extrahován a testován na obsah celkové oxidační kapacity.

Kvantifikace TOC v GCF:

Vzorky GCF obou skupin byly testovány pomocí techniky ELISA pro odhad úrovně celkové oxidační kapacity (TOC) v GCF následovně:

TOC byl extrahován z papírového proužku přidáním 100 ul fyziologického roztoku s fosfátovým pufrem do eppendorfovy zkumavky, poté byl promíchán na vortexu a následně centrifugován po dobu 10 minut při 3000Xg. Supernatant byl použit pro odhad TOC. Pro kvantitativní stanovení koncentrací lidského TOC v GCF byla použita souprava PerOx (TOS/TOC) Immun-diagnostik Assay (ELISA). ELISA je určena pro kvantitativní stanovení celkového oxidačního stavu/kapacity (TOS/TOC) v plazmě kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA), séru a supernatantech buněčných kultur.

Stanovení peroxidů se provádí reakcí peroxidázy s peroxidy ve vzorku s následnou konverzí TMB (tetra-methylbenzidinu) na barevný produkt. Po přidání zastavovacího roztoku byly vzorky měřeny při 450 nm ve čtečce mikrotitračních destiček. Kvantifikace se provádí dodaným kalibrátorem