El efecto de la vitamina C sobre la capacidad oxidante total del GCF en pacientes fumadores con periodontitis

Todos los sujetos fueron examinados mediante un examen periodontal completo y se obtuvieron gráficos periodontales completos y se tomaron radiografías periapicales de toda la boca utilizando la técnica paralela de cono largo en el momento del examen inicial para confirmar el diagnóstico.

Ambos grupos (fumadores con periodontitis grado B en estadio III-IV) recibieron un raspado bucal completo y un alisado radicular utilizando un raspador ultrasónico e instrumentos manuales bajo anestesia local, completados en 2 visitas. Los pacientes recibieron instrucciones detalladas sobre las medidas de control de la placa que podían realizar ellos mismos: cepillado dental dos veces al día con un cepillo y pasta dentífrica y limpieza interdental una vez al día con palillos triangulares de madera y/o cepillos interdentales enjuague con enjuague bucal con clorhexidina HCL al 0,125 % (Hexitol®). utilizado dos veces al día durante 2 semanas. El grupo II recibió vitamina C antioxidante 2 gramos/día durante cuatro semanas.

Recolección de muestra de líquido crevicular gingival (GCF):

En ambos grupos, las muestras de GCF se recolectaron en la visita inicial y se recolectaron nuevamente 3 meses después del tratamiento no quirúrgico de la siguiente manera: en el área seleccionada (el sitio más afectado periodontalmente), toda la placa supragingival detectada clínicamente se eliminó cuidadosamente para minimizar la contaminación del tiras de papel por la placa. Luego, los dientes seleccionados se lavaron suavemente con agua y los sitios en estudio se aislaron con rollos de algodón para evitar la contaminación con saliva y se secaron suavemente con una jeringa de aire. Se colocaron tiras de papel filtro a la entrada de la grieta y se dejaron en su lugar por 30 segundos y luego se colocaron en plástico eppendorf. Se descartaron las tiras con cualquier contaminación de placa, saliva o sangre. La muestra del sitio individual se almacenó a -80°C para su posterior procesamiento. A continuación, se extrajo el GCF y se ensayó el contenido de la capacidad oxidante total.

Cuantificación de TOC en GCF:

Las muestras de GCF de ambos grupos se analizaron utilizando la técnica ELISA para estimar el nivel de capacidad oxidante total (TOC) en GCF de la siguiente manera:

El TOC se extrajo de la tira de papel agregando 100 μl de solución salina tamponada con fosfato al tubo eppendorf, luego se mezcló con vórtex y luego se centrifugó durante 10 min a 3000Xg. El sobrenadante se utilizó para la estimación de TOC. Para la determinación cuantitativa de las concentraciones de TOC humano en GCF, se utilizó el kit PerOx (TOS/TOC) Immun-diagnostik Assay (ELISA). ELISA está destinado a la determinación cuantitativa del estado/capacidad oxidativa total (TOS/TOC) en sobrenadantes de plasma, suero y cultivo celular con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA).

La determinación de los peróxidos se realiza mediante la reacción de una peroxidasa con peróxidos en la muestra seguida de la conversión de TMB (Tetra-metilbencidina) a un producto coloreado. Después de la adición de una solución de parada, las muestras se midieron a 450 nm en un lector de placas de microtitulación. La cuantificación es realizada por el calibrador entregado.